Staphylococcus, Micrococcus et ex-Micrococcus
373
6.12.1. Composition chimique du milieu de culture
La thermonucléase est recherchée sur le milieu ADN-bleu de toluidine Bio-Rad.
La composition chimique (formule type) de ce milieu de culture est la
suivante :
Tampon TRIS 0,05 M, pH 9 ................................................................ 1 000 mL
ADN........................................................................................................ 0,3 g
CaCl20,01M...........................................................................................
1 mL
Chlorure de sodium................................................................................ 10 g
Bleu de toluidine 0,1 M....................................................................... 3 mL
Agar.......................................................................................................... 10 g
pH final 8,6
Ce milieu est disponible en tubes de 8 mL à couler dans des boîtes de Pétri de
55 mm de diamètre au moment de l’emploi.
6.12.2. Protocole du test thermonucléase
Repiquer la souche à identifier dans un tube de bouillon cœur-cervelle bio-Rad.
Incuber à 37 °C pendant 18 à 24 heures dans une étuve ou dans un bain-marie
agité pendant 3 à 4 heures.
Chauffer la culture en bouillon cœur-cervelle à 100 °C pendant 15 minutes,
puis laisser refroidir.
Prendre une boîte de Pétri de milieu ADN-bleu de toluidine dont la surface a
été séchée. Découper à l’emporte-pièce, dans ce milieu, 4 a 6 puits de 4 a . mm
de diamètre.
À l’aide d’une pipette Pasteur stérile, remplir totalement un puits avec quelques pL (8 uL au minimum) de la culture. Remplir autant de puits qu il y a de
souches à étudier.
Incuber à 37 °C pendant 4 heures au minimum.
6.7.2. 3. Lecture et interprétation du milieu
Les observations du test thermonucléase sont données dans le tableau 122.
Tableau 122 ■ Observations du test thermonucléase libre.
Observations
Test thermonucléase
Staphylocoques
Zone de métachromasie rose
supérieure à 1 mm autour du
+
Staphylococcus aureus en
général
S. intermedius. S. hyicus.
S. schleiferi
puits
±
S. carnosus
Pas de zone rose
-
Autres espèces de staphylocoques________ _
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6.12.1. Composition chimique du milieu de culture
La thermonucléase est recherchée sur le milieu ADN-bleu de toluidine Bio-Rad.
La composition chimique (formule type) de ce milieu de culture est la
suivante :
Tampon TRIS 0,05 M, pH 9 ................................................................ 1 000 mL
ADN........................................................................................................ 0,3 g
CaCl20,01M...........................................................................................
1 mL
Chlorure de sodium................................................................................ 10 g
Bleu de toluidine 0,1 M....................................................................... 3 mL
Agar.......................................................................................................... 10 g
pH final 8,6
Ce milieu est disponible en tubes de 8 mL à couler dans des boîtes de Pétri de
55 mm de diamètre au moment de l’emploi.
6.12.2. Protocole du test thermonucléase
Repiquer la souche à identifier dans un tube de bouillon cœur-cervelle bio-Rad.
Incuber à 37 °C pendant 18 à 24 heures dans une étuve ou dans un bain-marie
agité pendant 3 à 4 heures.
Chauffer la culture en bouillon cœur-cervelle à 100 °C pendant 15 minutes,
puis laisser refroidir.
Prendre une boîte de Pétri de milieu ADN-bleu de toluidine dont la surface a
été séchée. Découper à l’emporte-pièce, dans ce milieu, 4 a 6 puits de 4 a . mm
de diamètre.
À l’aide d’une pipette Pasteur stérile, remplir totalement un puits avec quelques pL (8 uL au minimum) de la culture. Remplir autant de puits qu il y a de
souches à étudier.
Incuber à 37 °C pendant 4 heures au minimum.
6.7.2. 3. Lecture et interprétation du milieu
Les observations du test thermonucléase sont données dans le tableau 122.
Tableau 122 ■ Observations du test thermonucléase libre.
Observations
Test thermonucléase
Staphylocoques
Zone de métachromasie rose
supérieure à 1 mm autour du
+
Staphylococcus aureus en
général
S. intermedius. S. hyicus.
S. schleiferi
puits
±
S. carnosus
Pas de zone rose
-
Autres espèces de staphylocoques________ _