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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Sulfate d’ammonium............................................................................
2
Agar........................................................................................................
1,5
Solution de vitamines.......................................................................... 10,5 mL
Solution d'oligo-éléments.................................................................... 10 mL
Phosphate monosodique...................................................................... 6,24
Chlorure de potassium........................................................................
1,5
pH final de 7,0 à 7,2
Ce milieu est disponible en ampoules de 7 mL.
5.2.3. Préparation, inoculation et incubation de la galerie
• À partir d'une culture pure de 18 à 24 heures d’un bacille Gram- (non
entérobactérie et non fastidieux) sur une gélose trypcase soja (par exemple),
préparer une suspension bactérienne homogène d’opacité égale à 0,5 de Mc
Farland dans une ampoule d’APl NaCl 0,85 % Medium ou dans un tube
contenant 2 mL de solution saline à 0,85 % sans additif.
Remplir les microtubes (et non les cupules) des tests NO3 à PNPG avec la suspension préparée bien ajustée à 0,5 de Mc Farland.
• Transférer ensuite 200 pL environ de la suspension précédente dans une
ampoule d'API AUX Medium et homogénéiser avec la pipette en évitant la
formation de bulles. Remplir les microtubes et les cupules des tests GLU à PAC
en veillant à créer un niveau horizontal ou légèrement convexe.
Remplir d'huile de paraffine les cupules des trois tests soulignés (GLU, ADH.
URE) pour former un ménisque convexe.
► Remarque
Consulter éventuellement la fiche technique du fabricant pour des informations complémentaires sur la préparation de l’inoculum et l’inoculation de cette
galerie.
Incuber la galerie dans sa boîte d’incubation à 29 ± 2 °C pendant 24 ± 2 heures.
5.2.4. Lecture de la galerie
Après incubation, lire la galerie en suivant les conseils techniques donnés cidessous et en se référant au tableau de lecture dont un extrait est reproduit dans
le tableau 116.
5.2.4.1. Tests GLU. ADH. URE, ESC, GEL, PNPG
Ils correspondent aux réactions suivantes :
test GLU : fermentation du glucose, révélée par un indicateur de pH ;
- test ADH : recherche de l'arginine dihydrolase hydrolysant la L-arginine ,
- test IRE : recherche de 1 uréase décomposant l’urée ;
test ESC : hydrolyse de l’esculine en présence de citrate de fer ;
- test GEL : hydrolyse de la gélatine ;
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Sulfate d’ammonium............................................................................
2
Agar........................................................................................................
1,5
Solution de vitamines.......................................................................... 10,5 mL
Solution d'oligo-éléments.................................................................... 10 mL
Phosphate monosodique...................................................................... 6,24
Chlorure de potassium........................................................................
1,5
pH final de 7,0 à 7,2
Ce milieu est disponible en ampoules de 7 mL.
5.2.3. Préparation, inoculation et incubation de la galerie
• À partir d'une culture pure de 18 à 24 heures d’un bacille Gram- (non
entérobactérie et non fastidieux) sur une gélose trypcase soja (par exemple),
préparer une suspension bactérienne homogène d’opacité égale à 0,5 de Mc
Farland dans une ampoule d’APl NaCl 0,85 % Medium ou dans un tube
contenant 2 mL de solution saline à 0,85 % sans additif.
Remplir les microtubes (et non les cupules) des tests NO3 à PNPG avec la suspension préparée bien ajustée à 0,5 de Mc Farland.
• Transférer ensuite 200 pL environ de la suspension précédente dans une
ampoule d'API AUX Medium et homogénéiser avec la pipette en évitant la
formation de bulles. Remplir les microtubes et les cupules des tests GLU à PAC
en veillant à créer un niveau horizontal ou légèrement convexe.
Remplir d'huile de paraffine les cupules des trois tests soulignés (GLU, ADH.
URE) pour former un ménisque convexe.
► Remarque
Consulter éventuellement la fiche technique du fabricant pour des informations complémentaires sur la préparation de l’inoculum et l’inoculation de cette
galerie.
Incuber la galerie dans sa boîte d’incubation à 29 ± 2 °C pendant 24 ± 2 heures.
5.2.4. Lecture de la galerie
Après incubation, lire la galerie en suivant les conseils techniques donnés cidessous et en se référant au tableau de lecture dont un extrait est reproduit dans
le tableau 116.
5.2.4.1. Tests GLU. ADH. URE, ESC, GEL, PNPG
Ils correspondent aux réactions suivantes :
test GLU : fermentation du glucose, révélée par un indicateur de pH ;
- test ADH : recherche de l'arginine dihydrolase hydrolysant la L-arginine ,
- test IRE : recherche de 1 uréase décomposant l’urée ;
test ESC : hydrolyse de l’esculine en présence de citrate de fer ;
- test GEL : hydrolyse de la gélatine ;