Clostridium
241
5.3.
Préparation, inoculation et incubation de la galerie
Vérifier que la souche bactérienne à identifier possède bien les caractéristiques
des germes anaérobies (cf. supra, tableau 85).
À partir d’une colonie isolée, réaliser une subculture sur une gélose Columbia
au sang de mouton ou de cheval en boîte de Pétri fraîchement préparée (cf. première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du matériel et des milieux
de culture », paragraphe 4.1.2.2.) ; elle doit être additionnée de vitamine K3 si la
bactérie anaérobie provient d’un groupe de colonies pigmentées en noir.
Incuber à 36 ± 2 °C pendant 24 heures en anaérobiose.
À l’aide d’un écouvillon stérile, récolter la culture obtenue sur la gélose
Columbia au sang et la disperser dans une ampoule de milieu API® Suspension
Medium ou dans de l’eau distillée stérile sans additif.
La suspension doit être d’opacité égale à 4 de Mac Farland par rapport au
témoin d’opacité (MacFarland Standard). En cas de lecture automatique de la
galerie, ajuster impérativement l’opacité de la suspension avec le Densitomètre
ATB " ou le Densimat bioMérieux" SA.
Ensemencer la galerie de manière manuelle ou automatique à l’aide de l’inoculateur ATB" bioMérieux® SA en respectant le mode opératoire du fabricant.
Incuber à 36 ± 2 °C pendant 4 à 4 h 30 en aérobiose.
5.4.
Lecture de la galerie
Après incubation, la lecture de cette galerie se fait soit en lecture automatique
à l’aide des instruments ATB" Expression ou mini API' bioMérieux® SA, soit
en lecture visuelle.
Pour cette dernière, lire les réactions en appliquant le tableau de lecture, dont
un large extrait est donné dans le tableau 86 A (première rangée de cupules) et
86 B (seconde rangée de cupules). Noter les résultats sur la fiche de résultats.
lableau 86A ■ Extrait du tableau de lecture de la galerie Rapid ID 32 A.
Test
Composants actifs (réactions/enzymes)
Résultat
Négatif
Positif
URE1
Urée (uréase)
Jaune
Rouge
_ADH
L-arginine (arginine dihydrolase)
aGAL
4-nitrophényl-aD-galactopyranoside
(a-galactosidase)
Incolore
Jaune
ÉGAL
4-nitrophényl-BD-galactopyranoside
(p-galactosidase)
Pgp 4-nitrophényl-PD-galactopyranoside-6-phophatase-2CHA
(|3-galactosidase 6-phosphate)
241
5.3.
Préparation, inoculation et incubation de la galerie
Vérifier que la souche bactérienne à identifier possède bien les caractéristiques
des germes anaérobies (cf. supra, tableau 85).
À partir d’une colonie isolée, réaliser une subculture sur une gélose Columbia
au sang de mouton ou de cheval en boîte de Pétri fraîchement préparée (cf. première partie, chapitre 3 « Préparation et stérilisation du matériel et des milieux
de culture », paragraphe 4.1.2.2.) ; elle doit être additionnée de vitamine K3 si la
bactérie anaérobie provient d’un groupe de colonies pigmentées en noir.
Incuber à 36 ± 2 °C pendant 24 heures en anaérobiose.
À l’aide d’un écouvillon stérile, récolter la culture obtenue sur la gélose
Columbia au sang et la disperser dans une ampoule de milieu API® Suspension
Medium ou dans de l’eau distillée stérile sans additif.
La suspension doit être d’opacité égale à 4 de Mac Farland par rapport au
témoin d’opacité (MacFarland Standard). En cas de lecture automatique de la
galerie, ajuster impérativement l’opacité de la suspension avec le Densitomètre
ATB " ou le Densimat bioMérieux" SA.
Ensemencer la galerie de manière manuelle ou automatique à l’aide de l’inoculateur ATB" bioMérieux® SA en respectant le mode opératoire du fabricant.
Incuber à 36 ± 2 °C pendant 4 à 4 h 30 en aérobiose.
5.4.
Lecture de la galerie
Après incubation, la lecture de cette galerie se fait soit en lecture automatique
à l’aide des instruments ATB" Expression ou mini API' bioMérieux® SA, soit
en lecture visuelle.
Pour cette dernière, lire les réactions en appliquant le tableau de lecture, dont
un large extrait est donné dans le tableau 86 A (première rangée de cupules) et
86 B (seconde rangée de cupules). Noter les résultats sur la fiche de résultats.
lableau 86A ■ Extrait du tableau de lecture de la galerie Rapid ID 32 A.
Test
Composants actifs (réactions/enzymes)
Résultat
Négatif
Positif
URE1
Urée (uréase)
Jaune
Rouge
_ADH
L-arginine (arginine dihydrolase)
aGAL
4-nitrophényl-aD-galactopyranoside
(a-galactosidase)
Incolore
Jaune
ÉGAL
4-nitrophényl-BD-galactopyranoside
(p-galactosidase)
Pgp 4-nitrophényl-PD-galactopyranoside-6-phophatase-2CHA
(|3-galactosidase 6-phosphate)