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Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
5.1.
Composition de la galerie
Pour la présentation générale des galeries API : cf. première partie, chapitre 3
« Préparation et stérilisation du matériel et des milieux de culture », paragraphe
4.3.2.
La galerie API Campy est composée de 10 cupules (première partie de la galerie) et de 10 microtubes surmontés de cupules (seconde partie de la galerie)
contenant des substrats déshydratés, qui permettent de réaliser 20 tests biochimiques (cf. infra, tableaux 82A et 82B) :
- les 10 tests de la première partie de la galerie sont conventionnels (uréase.
réduction des nitrates...) et enzymatiques (phosphatase alcaline...) ;
- les 10 tests de la deuxième partie de la galerie sont des tests d’assimilation
de substrats chimiques (D-glucose, acide propionique...) ou d’inhibition par des
antibiotiques (acide nalidixique, érythromycine...) sauf le test H2S conventionnel.
Cette galerie est composée de deux parties qui doivent être séparées, puis inoculées et incubées dans deux boîtes d’incubation.
• Le test catalase constituant le 21e test d’identification doit être réalisé sur la
souche à identifier (cf. première partie, chapitre 5 « Milieux de culture et tests
biochimiques pour l’identification bactérienne », paragraphe 1.2.).
• La deuxième partie de la galerie est inoculée avec le milieu API AUX
Medium, dont la composition chimique qsp 1 000 mL d’eau déminéralisée est :
Sulfate d'ammonium................................................................................
2
Phosphate monosodique.......................................................................
6,24
Chlorure de potassium.........................................................................
1,5
Gélose..................................................................................................... 1,5
Solution de vitamines............................................................................. 10,5 mL
Solution d’oligo-éléments....................................................................... 10,5 mL
pH 7,0 à 7,2 à 25 °C
Ce milieu est disponible en ampoules de 7 mL.
5.2.
Préparation, inoculation et incubation de la galerie
Elles sont exposées d après la fiche technique du fabricant, qui doit, malgré
tout, être consultée pour une présentation complète.
\ érifier que la souche à identifier possède les propriétés caractéristiques du
groupe des bacilles a Gram—, incurvés ou spiralés, microaérophiles ou anaérobies, oxydase positive (cf. supra, tableau 81 ).
Prêleser une colonie bien isolée et préparer une subculture par isolement à la
surface d une gélose au sang en boîte de Pétri.
Incuber la boîte à 36 ± 2 °C pendant 24 à 48 heures (jusqu’à 72 heures pour
les germes à croissance lente).
• A partir de la subculture, à l’aide d’un écouvillon stérile, préparer une
suspension bactérienne homogène, d’opacité égale à 6 de Mac Farland dans une
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
5.1.
Composition de la galerie
Pour la présentation générale des galeries API : cf. première partie, chapitre 3
« Préparation et stérilisation du matériel et des milieux de culture », paragraphe
4.3.2.
La galerie API Campy est composée de 10 cupules (première partie de la galerie) et de 10 microtubes surmontés de cupules (seconde partie de la galerie)
contenant des substrats déshydratés, qui permettent de réaliser 20 tests biochimiques (cf. infra, tableaux 82A et 82B) :
- les 10 tests de la première partie de la galerie sont conventionnels (uréase.
réduction des nitrates...) et enzymatiques (phosphatase alcaline...) ;
- les 10 tests de la deuxième partie de la galerie sont des tests d’assimilation
de substrats chimiques (D-glucose, acide propionique...) ou d’inhibition par des
antibiotiques (acide nalidixique, érythromycine...) sauf le test H2S conventionnel.
Cette galerie est composée de deux parties qui doivent être séparées, puis inoculées et incubées dans deux boîtes d’incubation.
• Le test catalase constituant le 21e test d’identification doit être réalisé sur la
souche à identifier (cf. première partie, chapitre 5 « Milieux de culture et tests
biochimiques pour l’identification bactérienne », paragraphe 1.2.).
• La deuxième partie de la galerie est inoculée avec le milieu API AUX
Medium, dont la composition chimique qsp 1 000 mL d’eau déminéralisée est :
Sulfate d'ammonium................................................................................
2
Phosphate monosodique.......................................................................
6,24
Chlorure de potassium.........................................................................
1,5
Gélose..................................................................................................... 1,5
Solution de vitamines............................................................................. 10,5 mL
Solution d’oligo-éléments....................................................................... 10,5 mL
pH 7,0 à 7,2 à 25 °C
Ce milieu est disponible en ampoules de 7 mL.
5.2.
Préparation, inoculation et incubation de la galerie
Elles sont exposées d après la fiche technique du fabricant, qui doit, malgré
tout, être consultée pour une présentation complète.
\ érifier que la souche à identifier possède les propriétés caractéristiques du
groupe des bacilles a Gram—, incurvés ou spiralés, microaérophiles ou anaérobies, oxydase positive (cf. supra, tableau 81 ).
Prêleser une colonie bien isolée et préparer une subculture par isolement à la
surface d une gélose au sang en boîte de Pétri.
Incuber la boîte à 36 ± 2 °C pendant 24 à 48 heures (jusqu’à 72 heures pour
les germes à croissance lente).
• A partir de la subculture, à l’aide d’un écouvillon stérile, préparer une
suspension bactérienne homogène, d’opacité égale à 6 de Mac Farland dans une