Bacillus et ex-Bacillus
203
- les Bacilli psychrophiles poussent à 20 °C pendant 18 à 48 heures ;
- les Bacilli thermophiles se développent à 55 °C pendant 12 à 16 heures.
• La culture de Bacillus lentus est favorisée par l’addition de 1 g d’urée/L dans
la gélose nutritive avant la stérilisation.
62.2.2. Préparation des suspensions
• À partir de la culture réalisée, prélever plusieurs colonies identiques et réaliser
dans le milieu API 50 CH/E une suspension d’opacité égale à 2 de Mc Farland,
vérifiée à l’aide du Densimat ou du Densitomètre ATB " bioMérieux® SA.
Sans les appareils ci-dessus, la procédure est donnée pour l’ensemencement
d’une galerie API 20 E (facultative pour les Bacilli) et d’une galerie API 50 CH :
- prélever toutes les colonies de la culture à l’aide d’un écouvillon et les disperser dans un tube contenant 1 mL d’eau physiologique stérile, afin d’obtenir
une suspension dense S ;
- réaliser une suspension d’opacité égale à 2 de Mc Farland en transférant un
certain nombre de gouttes de la suspension S dans une ampoule d’API NaCl
0,85 % (noter le nombre de gouttes et l’appeler n) ; cette suspension permet
d’ensemencer une galerie API 20 E ;
- préparer une suspension dans une ampoule de milieu API 50 CH/E en transférant à partir de la suspension S deux fois le nombre n de gouttes trouvé.
62.2.3. Inoculation des deux galeries et incubation
• Inoculer la galerie API 50 CH avec la suspension en remplissant tous les
microtubes en suivant les instructions du fabricant. L’addition d'huile de
paraffine dans les cupules est facultative ; elle est déconseillée pour les bactéries
aérobies strictes.
Incuber :
- les espèces thermophiles à 55 ± 2 °C pendant 3 h à 3 h 30, 6 h à 6 h 30 et
24 ± 2 heures en surélevant légèrement la base des tubes (pour conserver toute
production de gaz) ;
- les autres espèces à 29 ± 2 °C pendant 24 ± 2 heures et 48 ± 6 heures.
• Inoculer éventuellement les douze premiers tests d'une galerie API 20 E
। (c/. deuxième partie, chapitre 5 « Enterobacteriaceae (entérobactéries) », paraç graphe 7.3.) à partir de la suspension préparée. Incuber dans les mêmes
I conditions d’incubation que la galerie API 50 CH.
I
| 6.2.3. Lecture des deux galeries
o
•
Relever les résultats sur la fiche prévue à cet effet :
- pour les espèces thermophiles entre 3 h et 3 h 30, puis entre 6 h et 6 h 30 et
| enfin à 24 ± 2 heures d’incubation ;
'
- pour les autres espèces à 24 ± 2 heures et 48 ± 6 heures d’incubation.
• Pour la galerie API 50 CH, la lecture est présentée dans les tableaux 80A et
80B réalisés à partir des fiches techniques bioMérieux' * '
SA.
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- les Bacilli psychrophiles poussent à 20 °C pendant 18 à 48 heures ;
- les Bacilli thermophiles se développent à 55 °C pendant 12 à 16 heures.
• La culture de Bacillus lentus est favorisée par l’addition de 1 g d’urée/L dans
la gélose nutritive avant la stérilisation.
62.2.2. Préparation des suspensions
• À partir de la culture réalisée, prélever plusieurs colonies identiques et réaliser
dans le milieu API 50 CH/E une suspension d’opacité égale à 2 de Mc Farland,
vérifiée à l’aide du Densimat ou du Densitomètre ATB " bioMérieux® SA.
Sans les appareils ci-dessus, la procédure est donnée pour l’ensemencement
d’une galerie API 20 E (facultative pour les Bacilli) et d’une galerie API 50 CH :
- prélever toutes les colonies de la culture à l’aide d’un écouvillon et les disperser dans un tube contenant 1 mL d’eau physiologique stérile, afin d’obtenir
une suspension dense S ;
- réaliser une suspension d’opacité égale à 2 de Mc Farland en transférant un
certain nombre de gouttes de la suspension S dans une ampoule d’API NaCl
0,85 % (noter le nombre de gouttes et l’appeler n) ; cette suspension permet
d’ensemencer une galerie API 20 E ;
- préparer une suspension dans une ampoule de milieu API 50 CH/E en transférant à partir de la suspension S deux fois le nombre n de gouttes trouvé.
62.2.3. Inoculation des deux galeries et incubation
• Inoculer la galerie API 50 CH avec la suspension en remplissant tous les
microtubes en suivant les instructions du fabricant. L’addition d'huile de
paraffine dans les cupules est facultative ; elle est déconseillée pour les bactéries
aérobies strictes.
Incuber :
- les espèces thermophiles à 55 ± 2 °C pendant 3 h à 3 h 30, 6 h à 6 h 30 et
24 ± 2 heures en surélevant légèrement la base des tubes (pour conserver toute
production de gaz) ;
- les autres espèces à 29 ± 2 °C pendant 24 ± 2 heures et 48 ± 6 heures.
• Inoculer éventuellement les douze premiers tests d'une galerie API 20 E
। (c/. deuxième partie, chapitre 5 « Enterobacteriaceae (entérobactéries) », paraç graphe 7.3.) à partir de la suspension préparée. Incuber dans les mêmes
I conditions d’incubation que la galerie API 50 CH.
I
| 6.2.3. Lecture des deux galeries
o
•
Relever les résultats sur la fiche prévue à cet effet :
- pour les espèces thermophiles entre 3 h et 3 h 30, puis entre 6 h et 6 h 30 et
| enfin à 24 ± 2 heures d’incubation ;
'
- pour les autres espèces à 24 ± 2 heures et 48 ± 6 heures d’incubation.
• Pour la galerie API 50 CH, la lecture est présentée dans les tableaux 80A et
80B réalisés à partir des fiches techniques bioMérieux' * '
SA.