2(X)
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Suivant les indications du fabricant, préparer 900 mL de ce milieu de base,
stériliser à l’autoclave pendant 15 minutes à 121 °C, ramener le milieu de 45à
50 °C, puis ajouter le supplément sélectif (prêt à l’emploi) :
Émulsion de jaune d’œuf..................................................................... 100 mL
Sulfate de Polymyxine B 50 000 IU.................................................... 2 doses
pH 7,2 ± 0,2 à 25 °C
Les boîtes de Pétri préparées sont troubles et légèrement orange.
► Mode d’action
Le D-mannitol (polyalcool) fermenté produit des acides qui font virer l’indicateur de pH au jaune en milieu acide (mannitol+) ; dans le cas contraire, il vire
au rouge (mannitol-). Bacillus cereus est mannitol-,
Le sulfate de polymyxine B ou polymyxine B est un antibiotique de la famille
des polypeptides à spectre étroit (cf. annexe générale 6 « Notions sur les
antibiotiques »), qui agit notamment sur des entérobactéries et Pseudomonas
aeruginosa. B. cereus est assez résistant à certaines concentrations de cet antibiotique, ce qui permet l’inhibition de la flore bactérienne secondaire présente dans
l’aliment. L’ajout de polymyxine dans le milieu n’est utile qu’en cas de forte
contamination de l’aliment par d’autres bactéries.
Le jaune d’œuf contient de la lécithine (cf. première partie, chapitre?
« Milieux de culture et tests biochimiques pour l’identification bactérienne»,
paragraphe 4) ; cette dernière est en général hydrolysée rapidement par les souches de B. cereus, avant que les germes secondaires résistant à la polymyxine
aient atteint leur plein développement.
5.2.
Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer les boîtes de Pétri préparées en étalant 0,1 mL de l’aliment ou
d’une dilution décimale de l’aliment en surface.
Incuber à 32 °C pendant 18 à 40 heures.
53.
Lecture et interprétation du milieu
Les colonies bactériennes se développant sur ce milieu ont les aspects et couleurs suivants :
- les colonies de Bacillus cereus sont rugueuses, sèches (type R), avec un fond
coloré de rose à pourpre (mannitol—) et entourées d’un cercle de précipité blanc
(lécithinase+) ;
les colonies présentant un entourage jaune (mannitol+) ou un halo clair ne
sont pas de colonies de B. cereus.
Confirmer cinq colonies caractéristiques de B. cereus afin de les identifier.
I our cela, effectuer des tests biochimiques complémentaires (cf. infra, paragraphe 6.1.) ou ensemencer une microgalerie d’identification (cf infra, paragraphe 6.2.).
Microbiologie pratique pour le laboratoire d’analyses ou de contrôle sanitaire
Suivant les indications du fabricant, préparer 900 mL de ce milieu de base,
stériliser à l’autoclave pendant 15 minutes à 121 °C, ramener le milieu de 45à
50 °C, puis ajouter le supplément sélectif (prêt à l’emploi) :
Émulsion de jaune d’œuf..................................................................... 100 mL
Sulfate de Polymyxine B 50 000 IU.................................................... 2 doses
pH 7,2 ± 0,2 à 25 °C
Les boîtes de Pétri préparées sont troubles et légèrement orange.
► Mode d’action
Le D-mannitol (polyalcool) fermenté produit des acides qui font virer l’indicateur de pH au jaune en milieu acide (mannitol+) ; dans le cas contraire, il vire
au rouge (mannitol-). Bacillus cereus est mannitol-,
Le sulfate de polymyxine B ou polymyxine B est un antibiotique de la famille
des polypeptides à spectre étroit (cf. annexe générale 6 « Notions sur les
antibiotiques »), qui agit notamment sur des entérobactéries et Pseudomonas
aeruginosa. B. cereus est assez résistant à certaines concentrations de cet antibiotique, ce qui permet l’inhibition de la flore bactérienne secondaire présente dans
l’aliment. L’ajout de polymyxine dans le milieu n’est utile qu’en cas de forte
contamination de l’aliment par d’autres bactéries.
Le jaune d’œuf contient de la lécithine (cf. première partie, chapitre?
« Milieux de culture et tests biochimiques pour l’identification bactérienne»,
paragraphe 4) ; cette dernière est en général hydrolysée rapidement par les souches de B. cereus, avant que les germes secondaires résistant à la polymyxine
aient atteint leur plein développement.
5.2.
Ensemencement et incubation du milieu
Ensemencer les boîtes de Pétri préparées en étalant 0,1 mL de l’aliment ou
d’une dilution décimale de l’aliment en surface.
Incuber à 32 °C pendant 18 à 40 heures.
53.
Lecture et interprétation du milieu
Les colonies bactériennes se développant sur ce milieu ont les aspects et couleurs suivants :
- les colonies de Bacillus cereus sont rugueuses, sèches (type R), avec un fond
coloré de rose à pourpre (mannitol—) et entourées d’un cercle de précipité blanc
(lécithinase+) ;
les colonies présentant un entourage jaune (mannitol+) ou un halo clair ne
sont pas de colonies de B. cereus.
Confirmer cinq colonies caractéristiques de B. cereus afin de les identifier.
I our cela, effectuer des tests biochimiques complémentaires (cf. infra, paragraphe 6.1.) ou ensemencer une microgalerie d’identification (cf infra, paragraphe 6.2.).