Méthodes de travail en microbiologie
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Elles sont conçues pour la récupération par contact direct des contaminants
(bactéries, champignons) des surfaces de travail, du matériel, des mains, vêtements... Les differents types de lames existants sont présentés dans le tableau 47.
Tableau 47 ■ Types de lames gélosées double face ATL®.
Lames gélosées double face
avec neutralisant1
Milieux de culture2
Incubation
Flore totale (face 1) et coliformes ou entérobactéries
(face 2)
Gélose PCA avec TTC3
En général 30 à 37 °C
pendant 24 à 48 heures
Gélose VRBL4 ou VRBG5
Flore totale (face 1 ) et
levures-moisissures (face 2)
Gélose PCA avec TTC
En général 30 à 37 °C
pendant 24 à 48 heures
puis 20 à 25 °C pendant 24 à
48 heures
Milieu au « Rose bengale »
avec chloramphénicol
Flore totale (face 1 ) et flore
totale (face 2)
Gélose PCA avec TTC sur
les deux faces
En général 30 à 37 °C
pendant 24 à 48 heures
Levures-moisissures (face 1)
et « streptocoques fécaux »
(face 2)
Milieu au « Rose bengale »
avec chloramphénicol
En général 37 °C pendant 24
à 48 heures
Puis 20 à 25 °C pendant 24 à
48 heures
Milieu de Slanetz et Bartley
Aspergillus (moisissure)
(face 1 ) et Pseudomonas
(face 2)
Gélose Sabouraud au chloramphénicol
En général 35 °C pendant 24
à 48 heures
Puis 20 à 25 °C pendant 24 à
48 heures
Milieu d’isolement pour
Pseudomonas
1. Sauf pour la lame « Aspergillus/Pseudomonas ».
2. Pour la composition chimique des milieux de culture, consulter les Laboratoires Humeau.
3. Plate Count Agar (PCA) avec chlorure de triphényltétrazolium (TTC).
4. Gélose lactosée au cristal violet, au rouge neutre et à la bile.
5. Gélose glucosée au cristal violet, au rouge neutre et à la bile.
► Remarque
Les géloses PCA, VRBL et VRBG ont une composition chimique similaire
aux milieux conventionnels de même dénomination, mais elles contiennent en
plus ici des agents neutralisants.
5.3.2. Utilisation
Sortir une lame pliante ATL de son tube protecteur et d'incubation ; appliquer
avec une « force constante » pendant 10 secondes la lame d'un côté puis de
l’autre sur les surfaces à contrôler : matériel, mains, vêtements...
La remettre dans son tube et l'incuber suivant les indications données dans le
tableau 47.
5.3.3. Lecture et interprétation
Observer les colonies développées sur les lames en utilisant les informations
données dans le tableau 48. Puis compter leur nombre sur chaque face de la lame
et interpréter les résultats suivant l'exemple proposé pour la flore totale dans le
tableau 49.
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Elles sont conçues pour la récupération par contact direct des contaminants
(bactéries, champignons) des surfaces de travail, du matériel, des mains, vêtements... Les differents types de lames existants sont présentés dans le tableau 47.
Tableau 47 ■ Types de lames gélosées double face ATL®.
Lames gélosées double face
avec neutralisant1
Milieux de culture2
Incubation
Flore totale (face 1) et coliformes ou entérobactéries
(face 2)
Gélose PCA avec TTC3
En général 30 à 37 °C
pendant 24 à 48 heures
Gélose VRBL4 ou VRBG5
Flore totale (face 1 ) et
levures-moisissures (face 2)
Gélose PCA avec TTC
En général 30 à 37 °C
pendant 24 à 48 heures
puis 20 à 25 °C pendant 24 à
48 heures
Milieu au « Rose bengale »
avec chloramphénicol
Flore totale (face 1 ) et flore
totale (face 2)
Gélose PCA avec TTC sur
les deux faces
En général 30 à 37 °C
pendant 24 à 48 heures
Levures-moisissures (face 1)
et « streptocoques fécaux »
(face 2)
Milieu au « Rose bengale »
avec chloramphénicol
En général 37 °C pendant 24
à 48 heures
Puis 20 à 25 °C pendant 24 à
48 heures
Milieu de Slanetz et Bartley
Aspergillus (moisissure)
(face 1 ) et Pseudomonas
(face 2)
Gélose Sabouraud au chloramphénicol
En général 35 °C pendant 24
à 48 heures
Puis 20 à 25 °C pendant 24 à
48 heures
Milieu d’isolement pour
Pseudomonas
1. Sauf pour la lame « Aspergillus/Pseudomonas ».
2. Pour la composition chimique des milieux de culture, consulter les Laboratoires Humeau.
3. Plate Count Agar (PCA) avec chlorure de triphényltétrazolium (TTC).
4. Gélose lactosée au cristal violet, au rouge neutre et à la bile.
5. Gélose glucosée au cristal violet, au rouge neutre et à la bile.
► Remarque
Les géloses PCA, VRBL et VRBG ont une composition chimique similaire
aux milieux conventionnels de même dénomination, mais elles contiennent en
plus ici des agents neutralisants.
5.3.2. Utilisation
Sortir une lame pliante ATL de son tube protecteur et d'incubation ; appliquer
avec une « force constante » pendant 10 secondes la lame d'un côté puis de
l’autre sur les surfaces à contrôler : matériel, mains, vêtements...
La remettre dans son tube et l'incuber suivant les indications données dans le
tableau 47.
5.3.3. Lecture et interprétation
Observer les colonies développées sur les lames en utilisant les informations
données dans le tableau 48. Puis compter leur nombre sur chaque face de la lame
et interpréter les résultats suivant l'exemple proposé pour la flore totale dans le
tableau 49.