Méthodes de travail en microbiologie
99
32.2.3. Technique NPP 96 par microplaques
Cette technique de travail est fondée sur l’emploi de microplaques
« Escherichia coli » et « Entérocoques », qui contiennent respectivement au fond
de leurs 96 cupules (ou puits) un milieu de culture déshydraté spécifique d'une
enzyme présente chez chacun de ces deux germes :
- pour Escherichia coli, l’enzyme détectée est la P-glucuronidase et le substrat
spécifique est le MUG (4 méthylumbelliferyl-p-D-glucuronide) ;
-pour les entérocoques, l’enzyme détectée est la p-glucosidase et le substrat
spécifique est le MUD (4 méthylumbelliferyl-p-D-glucoside).
Chacun de ces substrats libère un composé fluorescent révélé dans l'ultraviolet, après une incubation de la microplaque à 44 ± 0,5 °C pendant au minimum
36 heures. Il suffit alors de dénombrer le nombre de puits fluorescents et une
table statistique fournit directement le nombre le plus probable (NPP) de bactéries présentes dans 100 mL d’eau avec un intervalle de confiance de 95 %.
La technique NPP 96 par microplaques est utilisée en microbiologie des eaux ;
les applications sont données dans le tableau 29.
Tableau 29 ■ Technique NPP 96 et applications.
Types d’eaux
Textes réglementaires et/ou normes
Baignades en eau de mer et en eau
douce
Circulaire DGS/VS4/n° 07/140 du 25 janvier 1995
Arrêté du 11 septembre 1995 modifiant...(JO du 28
septembre 1995)
Normes NF EN ISO 9308-3 et 7899-1 (1999)
Eaux douces superficielles et eaux
souterraines utilisées pour la
production d’eau destinée à la
consommation humaine
Arrêté du 17 septembre 2003 relatif aux méthodes
d’analyses des échantillons d’eaux et à leurs caractéristiques de performance (JO du 7 novembre 2003). Normes
NF EN ISO 9308-3 et 7899-1 (1999) citées dans ce texte
pour ces eaux
Eaux résiduaires
Pas de texte, mais recommandation des normes ci-dessus
32.2.4. Technique de filtration sur membranes
Le principe de la filtration sur membranes et les appareils à filtration sont présentés dans la première partie, chapitre 2 « Matériel principal du laboratoire de
microbiologie », paragraphe 3.3.
Des applications de cette technique sont données dans le tableau 30.
Iableau 30 ■ Technique de filtration sur membranes et applications.
Recherche et dénombrement de...
Normes
Coliformes (totaux) et Escherichia coli dans les eaux
désinfectées et autres eaux potables1
Norme NF EN 9308-1 (2000)
Escherichia coli P-glucuronidase+ à 44 °C dans les
aliments
Norme NF ISO 16649-1 (2001 )2
Entérocoques intestinaux (désignés « streptocoques
fécaux » dans la législation des eaux) dans les eaux
désinfectées et autres eaux potables1
Norme NF EN ISO 7899-2 (2000)
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32.2.3. Technique NPP 96 par microplaques
Cette technique de travail est fondée sur l’emploi de microplaques
« Escherichia coli » et « Entérocoques », qui contiennent respectivement au fond
de leurs 96 cupules (ou puits) un milieu de culture déshydraté spécifique d'une
enzyme présente chez chacun de ces deux germes :
- pour Escherichia coli, l’enzyme détectée est la P-glucuronidase et le substrat
spécifique est le MUG (4 méthylumbelliferyl-p-D-glucuronide) ;
-pour les entérocoques, l’enzyme détectée est la p-glucosidase et le substrat
spécifique est le MUD (4 méthylumbelliferyl-p-D-glucoside).
Chacun de ces substrats libère un composé fluorescent révélé dans l'ultraviolet, après une incubation de la microplaque à 44 ± 0,5 °C pendant au minimum
36 heures. Il suffit alors de dénombrer le nombre de puits fluorescents et une
table statistique fournit directement le nombre le plus probable (NPP) de bactéries présentes dans 100 mL d’eau avec un intervalle de confiance de 95 %.
La technique NPP 96 par microplaques est utilisée en microbiologie des eaux ;
les applications sont données dans le tableau 29.
Tableau 29 ■ Technique NPP 96 et applications.
Types d’eaux
Textes réglementaires et/ou normes
Baignades en eau de mer et en eau
douce
Circulaire DGS/VS4/n° 07/140 du 25 janvier 1995
Arrêté du 11 septembre 1995 modifiant...(JO du 28
septembre 1995)
Normes NF EN ISO 9308-3 et 7899-1 (1999)
Eaux douces superficielles et eaux
souterraines utilisées pour la
production d’eau destinée à la
consommation humaine
Arrêté du 17 septembre 2003 relatif aux méthodes
d’analyses des échantillons d’eaux et à leurs caractéristiques de performance (JO du 7 novembre 2003). Normes
NF EN ISO 9308-3 et 7899-1 (1999) citées dans ce texte
pour ces eaux
Eaux résiduaires
Pas de texte, mais recommandation des normes ci-dessus
32.2.4. Technique de filtration sur membranes
Le principe de la filtration sur membranes et les appareils à filtration sont présentés dans la première partie, chapitre 2 « Matériel principal du laboratoire de
microbiologie », paragraphe 3.3.
Des applications de cette technique sont données dans le tableau 30.
Iableau 30 ■ Technique de filtration sur membranes et applications.
Recherche et dénombrement de...
Normes
Coliformes (totaux) et Escherichia coli dans les eaux
désinfectées et autres eaux potables1
Norme NF EN 9308-1 (2000)
Escherichia coli P-glucuronidase+ à 44 °C dans les
aliments
Norme NF ISO 16649-1 (2001 )2
Entérocoques intestinaux (désignés « streptocoques
fécaux » dans la législation des eaux) dans les eaux
désinfectées et autres eaux potables1
Norme NF EN ISO 7899-2 (2000)