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Microbiologie pratique pour le laboratoire d analyses ou de contiôle sanitaire
de plus de 1 cm) et mélanger à 9 mL de milieu pour dilution (tube n° 1) : dilution
au 1/10.
► Recommandations normalisées
Éviter tout contact entre la pipette contenant l’inoculum et le diluant stérile;
bien homogénéiser chaque dilution pendant 5 à 10 secondes en utilisant de préférence un agitateur mécanique (type Vortex) ; changer de pipette entre chaque
dilution.
- transférer 1 mL de la dilution au 1/10 dans 9 mL de milieu de dilution (tube
n° 2) ; agiter la dilution au 1/100 ;
-transférer 1 mL de la dilution au 1/100 dans 9 mL de milieu pour dilution
(tube n° 3) ; agiter la dilution au 1/1 000.
Les dilutions sont en général arrêtées au 1/1 000 ; continuer éventuellement
avec d'autres dilutions si cela est nécessaire (dans le cas d’une eau résiduaire, par
exemple).
3.1.2. Pour les aliments et les eaux
• Pour la préparation de la suspension mère d’un aliment et des dilutions
décimales, consulter les normes citées dans la première partie, chapitre 2
« Matériel principal du laboratoire de microbiologie », paragraphe 3.1.
• Pour la préparation des dilutions décimales d’une eau à analyser, il n’y a pas
de norme spécifique. À défaut, on peut appliquer la technique décrite ci-dessus.
3.1.3. Pour les produits cosmétiques
• Pour le dénombrement des bactéries aérobies mésophiles ou des microorganismes aérobies mésophiles revivifiables, cf. infra, paragraphe 3.2.1. et
cf deuxième partie, chapitre 11 « Contrôle microbiologique des produits
cosmétiques », paragraphe 4.2.
• Pour la détection « par présence ou absence » des germes fécaux (Escherichia coli) et des germes pathogènes (Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa. Candida albicans) dans ces produits, il est nécessaire de procéder:
à un enrichissement sur un milieu non sélectif contenant des agents neutralisants et/ou dispersants ;
- puis, à un isolement sur des milieux sélectifs solides appropriés, coulés en
boîtes de Pétri (cf deuxième partie, chapitre 11 « Contrôle microbiologique des
produits cosmétiques », paragraphe 4.3.).
3.2.
1 echniques de dénombrement
3.2.1. Tec hnique de dénombrement par ensemencement en profondeur
Avant de préparer les dilutions de l'échantillon à analyser comme ci-dessus,
taire tondre au bain-marie bouillant le milieu d'ensemencement en flacon (Géloses X A. milieux sélectifs de recherche et de dénombrement de germe''
Microbiologie pratique pour le laboratoire d analyses ou de contiôle sanitaire
de plus de 1 cm) et mélanger à 9 mL de milieu pour dilution (tube n° 1) : dilution
au 1/10.
► Recommandations normalisées
Éviter tout contact entre la pipette contenant l’inoculum et le diluant stérile;
bien homogénéiser chaque dilution pendant 5 à 10 secondes en utilisant de préférence un agitateur mécanique (type Vortex) ; changer de pipette entre chaque
dilution.
- transférer 1 mL de la dilution au 1/10 dans 9 mL de milieu de dilution (tube
n° 2) ; agiter la dilution au 1/100 ;
-transférer 1 mL de la dilution au 1/100 dans 9 mL de milieu pour dilution
(tube n° 3) ; agiter la dilution au 1/1 000.
Les dilutions sont en général arrêtées au 1/1 000 ; continuer éventuellement
avec d'autres dilutions si cela est nécessaire (dans le cas d’une eau résiduaire, par
exemple).
3.1.2. Pour les aliments et les eaux
• Pour la préparation de la suspension mère d’un aliment et des dilutions
décimales, consulter les normes citées dans la première partie, chapitre 2
« Matériel principal du laboratoire de microbiologie », paragraphe 3.1.
• Pour la préparation des dilutions décimales d’une eau à analyser, il n’y a pas
de norme spécifique. À défaut, on peut appliquer la technique décrite ci-dessus.
3.1.3. Pour les produits cosmétiques
• Pour le dénombrement des bactéries aérobies mésophiles ou des microorganismes aérobies mésophiles revivifiables, cf. infra, paragraphe 3.2.1. et
cf deuxième partie, chapitre 11 « Contrôle microbiologique des produits
cosmétiques », paragraphe 4.2.
• Pour la détection « par présence ou absence » des germes fécaux (Escherichia coli) et des germes pathogènes (Staphylococcus aureus, Pseudomonas
aeruginosa. Candida albicans) dans ces produits, il est nécessaire de procéder:
à un enrichissement sur un milieu non sélectif contenant des agents neutralisants et/ou dispersants ;
- puis, à un isolement sur des milieux sélectifs solides appropriés, coulés en
boîtes de Pétri (cf deuxième partie, chapitre 11 « Contrôle microbiologique des
produits cosmétiques », paragraphe 4.3.).
3.2.
1 echniques de dénombrement
3.2.1. Tec hnique de dénombrement par ensemencement en profondeur
Avant de préparer les dilutions de l'échantillon à analyser comme ci-dessus,
taire tondre au bain-marie bouillant le milieu d'ensemencement en flacon (Géloses X A. milieux sélectifs de recherche et de dénombrement de germe''