Préparation et stérilisation du matériel et des milieux de culture
77
4.3.2. Identification par microméthode
Depuis les années 1970-1980, les microgaleries se sont développées dont les
galeries API bioMérieux® SA.
En effet, les travaux réalisés par Buissière et al. en 1967 et 1968 sur la microméthode d'identification les ont conduits à concevoir une méthodologie nouvelle, qui a été le fondement du «système API» (Delarras, 1981).
Historiquement, la société API SYSTEM SA qui fabriqua les premières galeries
API intégrera dans la décennie 1990 la société bioMérieux® SA qui commercialise deux types de galeries d’identification de micro-organismes (bactéries principalement).
4.3.2.1. Premier type
La galerie API d’origine (notée API ... dans le tableau 24), commercialisée
depuis la décennie 1970, est un système standardisé pour l'identification de
bactéries ; elle est composée d’un nombre variable de microtubes (10 ou 20 le
plus souvent), contenant des substrats déshydratés qui permettent de réaliser des
tests biochimiques.
Préparer une suspension d’opacité déterminée de la souche pure à identifier en
utilisant :
- soit le Densitomètre ATB ou le Densimat bioMérieux® SA ;
- soit le Mc Farland standard bioMérieux® SA.
Le Mc Farland standard est une série d’étalons d’opacité différente, présentées
en ampoules, obtenus avec des solutions de sulfate de baryum. Il permet une estimation de la densité des suspensions microbiennes, indispensables à une bonne
standardisation des méthodes de microbiologie.
La densité d’une suspension microbienne est estimée par comparaison à une
suspension d’opacité connue contenue dans une ampoule de même diamètre. Les
étalons de Mc Farland sont au nombre de 6 (0,5, 1, 2, 3, 4, 5) en ampoules de
diamètre 17,75 mm ; ils correspondent en moyenne à des concentrations bactériennes de 150xl06mL, 300xl06mL, 600xl06mL, 900xl06mL,
1200x 106mL, 1 500 x 106mL.
Inoculer manuellement la galerie et l’incuber dans les conditions indiquées.
Après incubation, la lecture de la galerie est visuelle, après addition ou non de
réactifs spécifiques pour lire les résultats de certains tests biochimiques
{cf. supra, tableau 16).
4.3.2.2. Second type
La galerie API (notée Rapid... ou ID... dans le tableau 24). conçue dans les
années 1990 comprend 32 cupules contenant des substrats déshydratés (des
cupules sont parfois vides).
Préparer une suspension d’opacité déterminée de la souche pure à identifier
comme pour le premier type de galerie.
77
4.3.2. Identification par microméthode
Depuis les années 1970-1980, les microgaleries se sont développées dont les
galeries API bioMérieux® SA.
En effet, les travaux réalisés par Buissière et al. en 1967 et 1968 sur la microméthode d'identification les ont conduits à concevoir une méthodologie nouvelle, qui a été le fondement du «système API» (Delarras, 1981).
Historiquement, la société API SYSTEM SA qui fabriqua les premières galeries
API intégrera dans la décennie 1990 la société bioMérieux® SA qui commercialise deux types de galeries d’identification de micro-organismes (bactéries principalement).
4.3.2.1. Premier type
La galerie API d’origine (notée API ... dans le tableau 24), commercialisée
depuis la décennie 1970, est un système standardisé pour l'identification de
bactéries ; elle est composée d’un nombre variable de microtubes (10 ou 20 le
plus souvent), contenant des substrats déshydratés qui permettent de réaliser des
tests biochimiques.
Préparer une suspension d’opacité déterminée de la souche pure à identifier en
utilisant :
- soit le Densitomètre ATB ou le Densimat bioMérieux® SA ;
- soit le Mc Farland standard bioMérieux® SA.
Le Mc Farland standard est une série d’étalons d’opacité différente, présentées
en ampoules, obtenus avec des solutions de sulfate de baryum. Il permet une estimation de la densité des suspensions microbiennes, indispensables à une bonne
standardisation des méthodes de microbiologie.
La densité d’une suspension microbienne est estimée par comparaison à une
suspension d’opacité connue contenue dans une ampoule de même diamètre. Les
étalons de Mc Farland sont au nombre de 6 (0,5, 1, 2, 3, 4, 5) en ampoules de
diamètre 17,75 mm ; ils correspondent en moyenne à des concentrations bactériennes de 150xl06mL, 300xl06mL, 600xl06mL, 900xl06mL,
1200x 106mL, 1 500 x 106mL.
Inoculer manuellement la galerie et l’incuber dans les conditions indiquées.
Après incubation, la lecture de la galerie est visuelle, après addition ou non de
réactifs spécifiques pour lire les résultats de certains tests biochimiques
{cf. supra, tableau 16).
4.3.2.2. Second type
La galerie API (notée Rapid... ou ID... dans le tableau 24). conçue dans les
années 1990 comprend 32 cupules contenant des substrats déshydratés (des
cupules sont parfois vides).
Préparer une suspension d’opacité déterminée de la souche pure à identifier
comme pour le premier type de galerie.