60
Figure 7.1. Principe du clonage
7.3.1. Les plasmides
Double molécule extrachromosomique indépendante, portant les caractéristiques suivantes :
Une origine de réplication
Un site unique pour l’enzyme de restriction (polylinker)
Un ou deux marqueurs de sélection
Taille d’insertion 4à 9Kb
Les plasmides naturels ont été utilisés comme vecteurs mais plusieurs inconvénients ont été
trouvés à savoir :
- La difficulté de trouver un site unique pour une enzyme de restriction
- La taille grande des plasmides qui ne permettaient pas l’insertion de grands fragments
- Nombre de copies.
Pour remédier à cela des plasmides synthétiques ont été crées à savoir : pBR322
 Caractéristiques du plasmide pBR322
a- est un petit plasmide constitué de 4361 paires de bases, dont la séquence nucléotidique est
complètement connue.
b- Il est possible d’y insérer un fragment d’ADN de bonne dimension sans toutefois dépasser
la taille de 10kpb sous peine de l’instabilité plasmidique.
c- Il possède deux gènes de résistances aux antibiotiques : l’un pour l’ampicilline (Amp