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5.4.4.1. Différentes étapes :
 phase exponentielle Au début de la réaction PCR, les réactifs sont en excès mais en
concentration assez faible afin d’éviter la compétition entre la renaturation des
amplicons et l’hybridation des amorces (primers). L’amplification est alors réalisée de
façon constante à un taux exponentiel.
 phase linéaire où le taux d’amplification devient extrêmement variable, même au
niveau de replica d’un même échantillon, à cause d’une compétition entre la
renaturation des amplicons et l’hybridation des amorces.
 phase plateau où le taux d’amplification décroît à près de zéro générant très peu
d’amplicons.
5.4.4.2. Mode de détection des produits d’amplification
Il existe deux principes généraux pour la détection quantitative des amplicons : les agents se
liant à l’ADN double brin (ex. SYBR Green I) et les sondes fluorescentes. Pour cette
dernière catégorie, il existe présentement quatre technologies principales : hydrolyse de
sondes (Taqman assay), hybridation de 2 sondes (HybProbes), balises moléculaires
(Molecular Beacons) et amorces scorpion (Scorpion primers)
Figure 5.8. Modes de détection du produit d’amplification