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5.4.4. La PCR en temps réel (Real-time PCR)
C’est une révolution dans l’utilisation de la PCR, cette technique consiste à mesurer la
quantité d’ADN polymérisé à chaque cycle (temps réel) grâce à un marqueur fluorescent. Elle
permet par son principe de faire des mesures quantitatives (expliquant l'appellation PCR
quantitative, qPCR) mais elle nécessite des thermocycleurs particuliers.
Des sondes fluorescentes se fixent :
- Soit sur l’ADN double brin (ex Technologie SYBR)
- Soit sur une séquence d’ADN précise (ex technologies Taqman et Beacon).
La mesure de la fluorescence permet de déterminer « en temps réel » si le fragment recherché
(amplicon) est effectivement présent-donc amplifié) sans avoir besoin de faire une
électrophorèse par exemple. De plus, la fluorescence émise est directement proportionnelle à
la quantité d’amplicons générés pendant la réaction de PCR. Cette quantité est corrélée à la
quantité d’ADN initiale de la matrice originale, ce qui permet pour d’autres applications de
doser la matrice originale.
Figure 5.7. Cinétique de la PCR en temps réel