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Chapitre 5. Technique d’amplification des acides nucléiques : polymerase
chain reaction (PCR)
Cette méthode de Biologie Moléculaire a été mise au point en 1985 par Mullis, qui obtint pour
ces travaux le prix Nobel de Chimie en 1993. Aujourd’hui, ce procédé révolutionnaire couplé
à l’utilisation d’une ADN polymerase thermorésistante permet d’obtenir, sans clonage, une
amplification considérable d’un fragment donné d’ADN.
La réaction PCR (Polymerase Chain Reaction) permet d'amplifier in vitro une région
spécifique d'un acide nucléique afin d'en obtenir une quantité suffisante pour le détecter et
l’étudier. Pour se faire, une série de réactions permettant la réplication d’une matrice d’ADN
double brin est répétée en boucle. Ainsi, au cours de la réaction PCR, les produits obtenus à la
fin de chaque cycle servent de matrice pour le cycle suivant, l’amplification est donc
exponentielle.
5.1. Les étapes de la PCR
La PCR est une succession de plusieurs cycles (25-45). Chaque cycle est composé de trois
étapes:
• Dénaturation: elle se fait à 90°C afin de dénaturer l’ADN pour obtenir des matrices
simple brin ;
• Hybridation: borner et amorcer la réplication de la séquence à amplifier à l’aide
d’amorces spécifiques elle se fait à une température entre 40-68°C ou T° hybridation
est égale à Tm-5°C
• Elongation: c’est la polymérisation du brin complémentaire à partir de 3’OH libre.
Elle se fait à 72°C, T°optimale pour la Taq polymerase.
Figure 5.1. Les différentes étapes de la PCR