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A
B
C
Figure 4.3. Les méthodes de marquage à chaud des sondes d’hybridations
A. multiamorçage au hasard : fixation des amorces, polymérisation par le fragment de
klenow en utilisant les dNTP radioactifs. B. Nick translation : création de coupure par
l’ADNase puis l’ADN pol I utilise l’activité exonucléasique 5’-3’ et polymérasique pour
insérer les dNTP radioactif. C : marquage à l’extrémité : action de la phosphatase pour
enlever le P en 5’ puis action de la kinase pour additionner le P radioactif.
4.3.2. Marquage froid
Ce marquage reste moins sensible que le marquage chaud mais moins toxique. Il peut se faire
par fluorescence, colorimétrie ou chimioluminescence ;
 Fluorescence : Absorption d'énergie lumineuse par une molécule (fluorochrome) à
une longueur d’onde. Retour à l'état fondamental par émission lumineuse à une plus
grande longueur d'onde que celle de stimulation = spectre de fluorescence .
Tableau 4.1. Les Fluorophores pour le marquage des acides nucléiques