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- la densité de flottaison de l’ADN dans un tel gradient dépend de sa composition en bases
selon l’équation:
ρ = 1,660 + 0,098X G+C
- par exemple, cette technique permet de séparer l’ADN nucléaire de l’ADN mitochondrial ou
chloroplastique ou plasmidique.
Figure 3.3. Purification d’ADN par ultracentrifugation sur gradient de chlorure de
césium
3.4. Dosage et pureté de l’ADN
Le dosage de l’ADN après extraction est indispensable pour le bon fonctionnement des
techniques réalisées par la suite. La méthode est basée sur la spectrophotométrie.
L’ADN absorbe à une longueur d’onde de 260nm, les protéines absorbent à 280nm
Vérifier la contamination par le phénol à une DO=270nm
La pureté de l’ADN: DO260/DO280= [1,8- 2]
<1,8 : contamination par les protéines
>2: Contamination par les ARN
1DO= 50µg/ml ADN double brin
1DO=25µg/ml ADN monobrin
1DO=40µg/ml ARN
Pour ADN double brin [ADN]µg/ml= (DO260- DO280)x 50x1/DIl
existe également un rapport DO260/DO230 pour les autres contaminants.
Il existe également des méthodes basées sur l’utilisation d’un fluorochrome qui se fixe sur
l’ADN et dont la quantité de fluorescence émise est proportionnelle à la quantité de DNA
présente.