18
B-6- Notion d’iso-schizomères
Des enzymes de restriction différentes peuvent reconnaître des mêmes sites spécifiques, on les
appelle iso-schizomères.
Les isoschizomères fournissent souvent après clivage enzymatique des fragments dont les
extrémités sont différentes.
• Exemple :
Les enzymes Kpn I et Acc65 I: reconnaissent le même site de restriction GGTACC.
Kpn I: coupe entre C/C alors que Acc65I coupe entre G/G
B-7- Notion de compatibles
Des enzymes de restriction compatibles sont des enzymes de restriction d’origine différentes
qui après clivage du site de restriction génèrent des bouts complémentaires qu’on peut relier
par une ligase.
2.2. Les ligases
Dans la cellule, l'ADN ligase répare les discontinuités qui peuvent apparaitre dans un ADN
double brins, notamment lors de la réplication. Ce type d'enzyme permet de relier les deux
fragments d'ADN double brins par la formation d’une liaison phosphodiester.
C'est une enzyme capitale puisqu'elle permet la construction de molécules d'ADN
recombinées.
a) ADN ligase
L'enzyme n'agit que si les deux ADN sont associés par des extrémités cohésives. Elle assure
la formation des liaisons phosphodiesters entre une extrémité 3'OH et une extrémité 5'
phosphate.
b) T4 ADN ligase
Elle est capable d'effectuer des liaisons entre deux ADN à bouts francs car elle est ATP
dépendante
2.3. Les polymérases et enzymes apparentées
Les polymérases d'acides nucléiques sont des enzymes qui synthétisent un nouveau brin
d'ADN complémentaire à une matrice d'ADN ou ARN. La plupart des polymérases ne
peuvent fonctionner que si la matrice d'ADN ou d'ARN possède une région double brin qui
agit comme amorce pour l'initiation de la polymérisation.