En outre, ce système offre l’avantage de permettre une distribution régulière du marqueur
radioactif. Celui-ci, mis en solution dans l’eau, va subir une diffusion progressive vers le
sédiment sans création de zones d’accumulation. A l’inverse, dans la technique précédente, l’injection de la molécule marquée est opérée ponctuellement créant ainsi une
répartition hétérogène du traceur.
Ces remarques nous ont conduits à choisir la méthode de l’interface reconstitué qui
correspond mieux aux objectifs fixés : distribution d’un hydrolysat de proteines dans un
système eau-sédiment et utilisation par les bactéries des A. A. libres. L’expérimentation a
été réalisée selon le protocole ci-dessous :
- le prélèvement de la couche superficielle (épaisseur = 2 cm) d’un sédiment côtier
(Port-Saint-Louis du Rhône) est tamisé pour enlever les débris et les organismes de taille
supérieure à 1 mm.
- le sédiment (35 ml) et l’eau sus-jacente (25 ml) sont placés dans chaque fiole d’expérimentation et agités vigoureusement ; une période de repos d’une nuit a pour effet d’entraîner
une sédimentation progressive des particules en fonction de leur taille et de leur densité ;
une fine pellicule apparaît à la surface du sédiment.
- après introduction du traceur radioactif dans l’eau sus-jacente, on procède à une légère
agitation circulaire de la fiole, facilitant la remise en suspension du film superficiel du
sédiment. La solution de 14 C-A.A. fournie par le C.E.A. (réf. CB 51) possède une activité
spécifique de 45 mCi/ mAt de C ; il s’agit d’un hydrolysat de chlorelles dont la composition
est la suivante : Ala : 620 ; Arg : 270 ; Asp : 440 ; Glu : 556 ; His : 56 ; Leu : 400 ; Ile : 193 ;
Phe : 198 ; Pro : 213 ; Ser : 356 ; Thr : 278 ; Tyr : 123 ; Val : 373 picomoles par microCurie.
Traceur radioactif
Incubation (0-120 mn)
1h30mn j
14C-C02
Centrifugation
10 mn è 2500 tr/mn
Sédiment
HCl 2N
Centrifugation
par combustion
Radioactivité
du sédiment
Hydrolyse HCl 6N
raction
non hydrolysable
Etude des 14C-À.A. par analyse CLHP
et détection de la radioactivité
14C-A.A. libres dissous
Figure l : Protocole expérimental
63
radioactif. Celui-ci, mis en solution dans l’eau, va subir une diffusion progressive vers le
sédiment sans création de zones d’accumulation. A l’inverse, dans la technique précédente, l’injection de la molécule marquée est opérée ponctuellement créant ainsi une
répartition hétérogène du traceur.
Ces remarques nous ont conduits à choisir la méthode de l’interface reconstitué qui
correspond mieux aux objectifs fixés : distribution d’un hydrolysat de proteines dans un
système eau-sédiment et utilisation par les bactéries des A. A. libres. L’expérimentation a
été réalisée selon le protocole ci-dessous :
- le prélèvement de la couche superficielle (épaisseur = 2 cm) d’un sédiment côtier
(Port-Saint-Louis du Rhône) est tamisé pour enlever les débris et les organismes de taille
supérieure à 1 mm.
- le sédiment (35 ml) et l’eau sus-jacente (25 ml) sont placés dans chaque fiole d’expérimentation et agités vigoureusement ; une période de repos d’une nuit a pour effet d’entraîner
une sédimentation progressive des particules en fonction de leur taille et de leur densité ;
une fine pellicule apparaît à la surface du sédiment.
- après introduction du traceur radioactif dans l’eau sus-jacente, on procède à une légère
agitation circulaire de la fiole, facilitant la remise en suspension du film superficiel du
sédiment. La solution de 14 C-A.A. fournie par le C.E.A. (réf. CB 51) possède une activité
spécifique de 45 mCi/ mAt de C ; il s’agit d’un hydrolysat de chlorelles dont la composition
est la suivante : Ala : 620 ; Arg : 270 ; Asp : 440 ; Glu : 556 ; His : 56 ; Leu : 400 ; Ile : 193 ;
Phe : 198 ; Pro : 213 ; Ser : 356 ; Thr : 278 ; Tyr : 123 ; Val : 373 picomoles par microCurie.
Traceur radioactif
Incubation (0-120 mn)
1h30mn j
14C-C02
Centrifugation
10 mn è 2500 tr/mn
Sédiment
HCl 2N
Centrifugation
par combustion
Radioactivité
du sédiment
Hydrolyse HCl 6N
raction
non hydrolysable
Etude des 14C-À.A. par analyse CLHP
et détection de la radioactivité
14C-A.A. libres dissous
Figure l : Protocole expérimental
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