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Efriorescences toxiques des eaux côtieres irançaises : écologie, écophysiologie, toxicolofiie
..... ...
··········-··········· ... ········
fa isant appel à la cytométrie en flux. El les se sont
heurtées au problème de la faib le intensité de
l' immuno-marquage qui, souvent, n'est pas plus
élevée que l' autofluorescence de fond ; dans ce
cas, il peut y avoir chevauchemen t des différentes
populations. En tout état de cause, la produ ction
d'antisérum nécessitant des centaines de mil liers
de cellules isolées, il n'existe actuel lement aucune
im muno-sonde disponible pour les espèces d u
genre Oinophysis.
Les sondes à oligonucléotides sont extrêmement
sensibles et spécifiques; el les sont util isées en
analyse de routine pour les identifications bactériennes. En reva nc he, leur uti l isation avec les
algues nuisib les est très récente. La spécificité de
ces sondes dépend fo rtement du degré d' unicité de
la séq uence cible d'AD N ou d'ARN . Une sonde
performante a au moins deux nucléotides sur une
vi ngtaine ne correspondant pas à la séquence
équi valen te c hez les espèces indésirables. Pour
l' instant, les efforts en matière de recherche algale
se sont concentrés sur le développemen t de la
méthode ; des sondes effi caces sont disponibl es
pour quelques espèces d'Aiexandrium et de Pseudonitzschia (Anderson, 1995 ; Scholi n et al., 1996;
M iller et Scholin, 1996).
Le matériel nécessaire à la préparation de la sonde
nucléique pouvant être obtenu par amplification
PCR de l' ARN à parti r d' un petit nombre de cellules, une sonde spécifique à Dinophysis acuminata a pu être récemment développée (Puel et al.,
sous presse) , Des amorces spécifiques, commençan t aux positions 711 et 1489 sur le segment
245 de I' A RN r d u dinofl agel lé Prorocentrum
m icans ont d'abord été utilisées pour la PCR. Le
produit ain si obtenu a ensuite ét é c loné et
séquencé. Un fragment 804 bp a ensuite été obtenu et aligné avec les séquences ARNr provenant
d'autres dinoflagellés. Deux o ligonucléotides dans
des domaines variables de la séq uence issue de
Dinophysis acum inata ont été sélectionnés et un
protocole défini pour la détection PCR de cette
espèce.
La nouvelle sonde permet la détection de O. acuminata dans des assemblages naturels à des densités aussi basses que 30 cellules.l- 1 , sans interférence avec les autres espèces phytoplanctoniques
(planche 1) . Brevetée par la société D.N.A. (Montferri er-sur-Lez) et I' IFREMER, cette sonde est
actuellement disponible sur le marché.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Planche 1- Sonde spécifique pour Dinophysis acuminata. Test
de sensibilité sur gel d 'aga rose avec 30 (2), 150 (3), 300 (4),
600 (5), 1500 (6), 3500 (7), 7500 (8) et 15 000 (9) cellules. (1 )
est le témoin négatif (pas de cellule) et (1 0) est le témoin positif (rRNA clone) (clichés de O. Pue/).
Cycle biologique
La connaissance du cycle biologique d' une espèce
nuisible est d' importance cruciale pour séparer le(s)
stade(s) nocif(s) éventuel(s) des stades non nocifs et
ensuite tenter de corréler les effets nuisibl es aux
conditions du milieu favorisant les stades nocifs. Le
dinoflagellé toxique Pfiesteria p iscimorte, surnommé « le prédateur embusqué », est l'exem p le
extrême d' une algue polymorph e présentant des
stades flagellaires et amiboïdes et des kystes ayant
tous des rô les différents (Bu rkholder et al., 1995 ;
Landsberg et al., 1995 ; Steidinger et al., 1995). Les
stades dormants constituent une phase importante
du cyc le biologique de nombreuses espèces
algales, car ils permettent la survie dans des conditions qui détruiraient normalement les stades actifs
correspondants.
Le rôle des kystes a été mis en évidence, pour les
diatomées (Hargraves et French, 1983 ; Smetacek,
Efriorescences toxiques des eaux côtieres irançaises : écologie, écophysiologie, toxicolofiie
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fa isant appel à la cytométrie en flux. El les se sont
heurtées au problème de la faib le intensité de
l' immuno-marquage qui, souvent, n'est pas plus
élevée que l' autofluorescence de fond ; dans ce
cas, il peut y avoir chevauchemen t des différentes
populations. En tout état de cause, la produ ction
d'antisérum nécessitant des centaines de mil liers
de cellules isolées, il n'existe actuel lement aucune
im muno-sonde disponible pour les espèces d u
genre Oinophysis.
Les sondes à oligonucléotides sont extrêmement
sensibles et spécifiques; el les sont util isées en
analyse de routine pour les identifications bactériennes. En reva nc he, leur uti l isation avec les
algues nuisib les est très récente. La spécificité de
ces sondes dépend fo rtement du degré d' unicité de
la séq uence cible d'AD N ou d'ARN . Une sonde
performante a au moins deux nucléotides sur une
vi ngtaine ne correspondant pas à la séquence
équi valen te c hez les espèces indésirables. Pour
l' instant, les efforts en matière de recherche algale
se sont concentrés sur le développemen t de la
méthode ; des sondes effi caces sont disponibl es
pour quelques espèces d'Aiexandrium et de Pseudonitzschia (Anderson, 1995 ; Scholi n et al., 1996;
M iller et Scholin, 1996).
Le matériel nécessaire à la préparation de la sonde
nucléique pouvant être obtenu par amplification
PCR de l' ARN à parti r d' un petit nombre de cellules, une sonde spécifique à Dinophysis acuminata a pu être récemment développée (Puel et al.,
sous presse) , Des amorces spécifiques, commençan t aux positions 711 et 1489 sur le segment
245 de I' A RN r d u dinofl agel lé Prorocentrum
m icans ont d'abord été utilisées pour la PCR. Le
produit ain si obtenu a ensuite ét é c loné et
séquencé. Un fragment 804 bp a ensuite été obtenu et aligné avec les séquences ARNr provenant
d'autres dinoflagellés. Deux o ligonucléotides dans
des domaines variables de la séq uence issue de
Dinophysis acum inata ont été sélectionnés et un
protocole défini pour la détection PCR de cette
espèce.
La nouvelle sonde permet la détection de O. acuminata dans des assemblages naturels à des densités aussi basses que 30 cellules.l- 1 , sans interférence avec les autres espèces phytoplanctoniques
(planche 1) . Brevetée par la société D.N.A. (Montferri er-sur-Lez) et I' IFREMER, cette sonde est
actuellement disponible sur le marché.
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
Planche 1- Sonde spécifique pour Dinophysis acuminata. Test
de sensibilité sur gel d 'aga rose avec 30 (2), 150 (3), 300 (4),
600 (5), 1500 (6), 3500 (7), 7500 (8) et 15 000 (9) cellules. (1 )
est le témoin négatif (pas de cellule) et (1 0) est le témoin positif (rRNA clone) (clichés de O. Pue/).
Cycle biologique
La connaissance du cycle biologique d' une espèce
nuisible est d' importance cruciale pour séparer le(s)
stade(s) nocif(s) éventuel(s) des stades non nocifs et
ensuite tenter de corréler les effets nuisibl es aux
conditions du milieu favorisant les stades nocifs. Le
dinoflagellé toxique Pfiesteria p iscimorte, surnommé « le prédateur embusqué », est l'exem p le
extrême d' une algue polymorph e présentant des
stades flagellaires et amiboïdes et des kystes ayant
tous des rô les différents (Bu rkholder et al., 1995 ;
Landsberg et al., 1995 ; Steidinger et al., 1995). Les
stades dormants constituent une phase importante
du cyc le biologique de nombreuses espèces
algales, car ils permettent la survie dans des conditions qui détruiraient normalement les stades actifs
correspondants.
Le rôle des kystes a été mis en évidence, pour les
diatomées (Hargraves et French, 1983 ; Smetacek,