Pharmacotoxicologie
Cellules BHK21 C13 : adduits à l'ADN
Numéro
Concentration en AO (nM)
Ad duits
0,01
0,1
1
2,5
5
1
0
0
13
1,6
0
2
0
0
16,4
3,6
0,9
3
0
0
16,9
1,5
0,8
4
0
0
14
1,7
0,9
8
0
0
4
0,95
0
9
0
0
1,45
0,6
10
0
0
2,7
0,6
0
12
0
0
4
0
0
26
0
0
1,3
0
0
27
0
0
1,9
0
0
28
0
0
2,2
0
0
29
0
0
2,7
0
0
30
0
0
2
0
0
31
0
0
0
0,4
0
Total
0
0
95,6
11
2,6
Tableau 1 - Niveaux des adduits à l'ADN détectés dans les cellules BHK21 C13 après exposition à I'AO pendant 24 heures. Les
valeurs sont exprimées en RAL, c 'est-à-dire en nombre d 'adduits/709 nucléotides.
Dix-neuf adduits ont été dénombrés avec les
BH K21 C13 et quatorze avec les HESV. Neuf sont
similaires dans les deux souches, tandis que dix
sont spécifiques aux BHK21 C13 et cinq aux HESV.
Le nombred'adduits diminue avec la dose d'AO et
disparaît aux concentrations toxiques (Fessard et
al., 1996, sous presse; Fessard, 1996). Les adduits
apparaissent sans addition de système d' activation
(59 hépatique). Les différences entre les réponses
des deux types cellulaires restent à élucider.
Comparaison d'effets cellulaires de l'AD
et du TPA
Les cellules en voie de transformation tumorale
perdent leurs capacités de communiquer par l' intermédiaire des « tight junctions » (jonctions communicantes) ; leur motilité est progressivement
accrue. Ces raisons expliquent l'attention apportée aux modifications du cytosquelette et des
communications cellulaires.
Pour la promotion des cancers, le TPA est l'ester de
phorbol-type qui sert de témoin positif. Au niveau
moléculaire, c'est un activateur de protéine kinase
C et son action provoque des modulations du
cytosquelette d' actine et une perte des échanges
cellulaires de molécules de fa ible poids moléculaire (<- 1 000 D) par les jonctions communicantes.
Sur les modèles cellulaires testés dans le cadre du
Programme, fibroblastes et kératinocytes, l' AO
induit des modifications spectaculaires du cytosquelette d'actine. Avec les cellules BHK 21 -C13,
on observe par immunofluorescence une évolution très spécifique non constatée entre autres pour
le TPA, avec un premier raccourcissement des faisceaux d' actine conduisant à une forme cellulaire
polygonale accompagné par l' apparition de
petites boursouflures périphériques (microblebbing), puis les fibres d' actine disparaissent, les
cellules devenant rondes. Des dosages de l'actine
F fibrillaire corroborent les données de la cytochimie, montrant, lorsque des tests de cytotoxicité au
rouge neutre (incorporation dans les cell ules) sont
effectués en parallèle, que la dépolyméris~tion de
l'actine apparaît plus précocement que la réponse
tox ique (Diogène et al., 1995).
169
Cellules BHK21 C13 : adduits à l'ADN
Numéro
Concentration en AO (nM)
Ad duits
0,01
0,1
1
2,5
5
1
0
0
13
1,6
0
2
0
0
16,4
3,6
0,9
3
0
0
16,9
1,5
0,8
4
0
0
14
1,7
0,9
8
0
0
4
0,95
0
9
0
0
1,45
0,6
10
0
0
2,7
0,6
0
12
0
0
4
0
0
26
0
0
1,3
0
0
27
0
0
1,9
0
0
28
0
0
2,2
0
0
29
0
0
2,7
0
0
30
0
0
2
0
0
31
0
0
0
0,4
0
Total
0
0
95,6
11
2,6
Tableau 1 - Niveaux des adduits à l'ADN détectés dans les cellules BHK21 C13 après exposition à I'AO pendant 24 heures. Les
valeurs sont exprimées en RAL, c 'est-à-dire en nombre d 'adduits/709 nucléotides.
Dix-neuf adduits ont été dénombrés avec les
BH K21 C13 et quatorze avec les HESV. Neuf sont
similaires dans les deux souches, tandis que dix
sont spécifiques aux BHK21 C13 et cinq aux HESV.
Le nombred'adduits diminue avec la dose d'AO et
disparaît aux concentrations toxiques (Fessard et
al., 1996, sous presse; Fessard, 1996). Les adduits
apparaissent sans addition de système d' activation
(59 hépatique). Les différences entre les réponses
des deux types cellulaires restent à élucider.
Comparaison d'effets cellulaires de l'AD
et du TPA
Les cellules en voie de transformation tumorale
perdent leurs capacités de communiquer par l' intermédiaire des « tight junctions » (jonctions communicantes) ; leur motilité est progressivement
accrue. Ces raisons expliquent l'attention apportée aux modifications du cytosquelette et des
communications cellulaires.
Pour la promotion des cancers, le TPA est l'ester de
phorbol-type qui sert de témoin positif. Au niveau
moléculaire, c'est un activateur de protéine kinase
C et son action provoque des modulations du
cytosquelette d' actine et une perte des échanges
cellulaires de molécules de fa ible poids moléculaire (<- 1 000 D) par les jonctions communicantes.
Sur les modèles cellulaires testés dans le cadre du
Programme, fibroblastes et kératinocytes, l' AO
induit des modifications spectaculaires du cytosquelette d'actine. Avec les cellules BHK 21 -C13,
on observe par immunofluorescence une évolution très spécifique non constatée entre autres pour
le TPA, avec un premier raccourcissement des faisceaux d' actine conduisant à une forme cellulaire
polygonale accompagné par l' apparition de
petites boursouflures périphériques (microblebbing), puis les fibres d' actine disparaissent, les
cellules devenant rondes. Des dosages de l'actine
F fibrillaire corroborent les données de la cytochimie, montrant, lorsque des tests de cytotoxicité au
rouge neutre (incorporation dans les cell ules) sont
effectués en parallèle, que la dépolyméris~tion de
l'actine apparaît plus précocement que la réponse
tox ique (Diogène et al., 1995).
169