n' avaient pas d' activité cytolytique sur les cellules
KB. Pour leur part, Gentien & Arzul (1 990) ont mis
en évidence la formation d' exotoxines liposolubles (retenues sélectivement sur adsorbants Flori sil et silice C18) présentant des propriétés allélopathiques vis-à-vis de compétiteurs phytoplanctoniques. L'analyse par c hromatographie
liquide (CLHP) du matériel dissous extractible au
mélange chloroforme-méthanol permet d' iso ler
au mo ins trois fractions actives dans les tests
hémolytiques sur des hématies de truites. Cependant, même si les effets toxiques de la phase dissoute se trouvent établis et attribués à des fractions
préc ises en c hromatographie CLH P, il manque
l' identification chimique des substances actives.
Dans le cas d ' une espèce mo rpholog iquement
voisine (Cyrodinium aureolum) reconn ue fortement ichtyotoxique en 1 988 le long des côtes
scandinaves, Yasumoto et al. (1 990) ont attribué
l' action hémolytique à la présence inhabituelle
dans les cel lules algales d' un acide gras polyinsaturé (acide octadécapentaénoïque) et d' une hémolysine identifiée, par spectrométrie de masse, au
digalactosyle glycérol monoacylé en C20 : S.
La caractérisation chimique des constituants actifs
dans les extraits lipid iques intracell ula ires de
C. cf. nagasakiense a été effectuée à partir de
cultures en masse d'une souche locale unialgale
isolée en rade de Brest lors d' un bloom toxique
(Partensky, 1 989).
Détermination de la structure
chimique de l'acide gras hémolytique
L' acide gras recherché a été isolé sous forme d' ester méthylique en combinant successivement les
capacités analytiques des c hromatographies en
phase normale sur colonne (Si02) et sur plaque
(CCM Si0 2- Ag N03) et en phase inverse (CLHP,
RPC18). Il a été identifié sans ambiguïté (fig. 1 p.
1 52) à l'acide « ali » cis 3, 6, 9, 12, 15 octadécapentaénoïque (C18 : Sco3) par la correspondance
des caractéristiques spectrales (spectrométrie de
masse BAR-SM-SM, IRTF, RMN du proton) et
ch romatographiques (CPG, CCM) avec une activité hémolytique sur différentes cibles biologiques
(Parrish et al., 1 993 ; Arzul et al., 1995). L' importance de la fraction des lipides polyinsaturés dans
l' extra it cel lulai re de G. cf. nagasakiense a été
mise à profit pour développer dans cette étude
Toxinogén~
une méthode de détection chimique de la toxicité potentielle des cultures algales à partir de la
proportion relative en lipides polyinsaturés dans
les échanti l lons. L' analyse est effectuée par la
technique chromatographique latroscan (CCMDIF) qui permet, par un choix judicieux des conditions d'élution, un dosage rapide des constituants
lipidiques acylés selon l' importance relative des
structures ca rbonées polyinsaturées et sa turées
(Parrish et al., 1992).
L' acide octadécapentaénoïque a été isolé en
quantité suffisante pour établir des courbes de
calibration d' effets sur d ifférentes cibles biologiques (Arzul et al., 1995). L'activité de cet acide
s'est avérée supéri eure à celle de ses homologues
d' insaturation moindre. Son mode d'action n'est
pas totalement clarifié. Il semble que la molécule
agisse par ses propriétés tensioactives. Sur la base
d' observations cytofluorimétriques, l'action de la
toxine se produirait au niveau des membranes par
création de pores (Gentien et al., 1991 ). La combinaison de l'oxygène avec les chaînes insaturées
pourrait entraîner la formation de peroxydes, responsables des altérations de la perméabi 1 ité
membranaire des cellules (Deby, 1991 ). L'élimination de l' oxygène d' un prélèvement toxique
hémolytique contenant Cymnodinium cf. nagasakiense, lui ôte sa propriété hémolytique. Ceci
montre le rôle de l' oxygène dans l' activité biotox ique de ce d inoflagellé (Arzul et al. in prep.).
Cependant, les capteurs de radicaux oxygène spécifiques aux espèces OH ou 0 2 = SOD, DMU,
Na2S03 ne réduisent que faiblement l' action
hémolytique. Ceci peut s'expliquer par le rôle
oxydant de l' hémoglobine contenue dans les
hématies.
Détermination de la structure
chimique de glycolipides
hémolytiques
Le test hémolytique effectué après la migration sur
plaque CCM révèle la présence dans les glycolipides de l'extrait C. cf. nagasakiense de constituants actifs correspondant notamment à la fraction MGDG (monogalactosyl diacyl glycérol).
Les différentes fractions glycolipidiques ont été
purifiées sur colonne Sep-Pak (si lica plus) et sur
p laque de silice imprégnée de nitrate d' argent
151
KB. Pour leur part, Gentien & Arzul (1 990) ont mis
en évidence la formation d' exotoxines liposolubles (retenues sélectivement sur adsorbants Flori sil et silice C18) présentant des propriétés allélopathiques vis-à-vis de compétiteurs phytoplanctoniques. L'analyse par c hromatographie
liquide (CLHP) du matériel dissous extractible au
mélange chloroforme-méthanol permet d' iso ler
au mo ins trois fractions actives dans les tests
hémolytiques sur des hématies de truites. Cependant, même si les effets toxiques de la phase dissoute se trouvent établis et attribués à des fractions
préc ises en c hromatographie CLH P, il manque
l' identification chimique des substances actives.
Dans le cas d ' une espèce mo rpholog iquement
voisine (Cyrodinium aureolum) reconn ue fortement ichtyotoxique en 1 988 le long des côtes
scandinaves, Yasumoto et al. (1 990) ont attribué
l' action hémolytique à la présence inhabituelle
dans les cel lules algales d' un acide gras polyinsaturé (acide octadécapentaénoïque) et d' une hémolysine identifiée, par spectrométrie de masse, au
digalactosyle glycérol monoacylé en C20 : S.
La caractérisation chimique des constituants actifs
dans les extraits lipid iques intracell ula ires de
C. cf. nagasakiense a été effectuée à partir de
cultures en masse d'une souche locale unialgale
isolée en rade de Brest lors d' un bloom toxique
(Partensky, 1 989).
Détermination de la structure
chimique de l'acide gras hémolytique
L' acide gras recherché a été isolé sous forme d' ester méthylique en combinant successivement les
capacités analytiques des c hromatographies en
phase normale sur colonne (Si02) et sur plaque
(CCM Si0 2- Ag N03) et en phase inverse (CLHP,
RPC18). Il a été identifié sans ambiguïté (fig. 1 p.
1 52) à l'acide « ali » cis 3, 6, 9, 12, 15 octadécapentaénoïque (C18 : Sco3) par la correspondance
des caractéristiques spectrales (spectrométrie de
masse BAR-SM-SM, IRTF, RMN du proton) et
ch romatographiques (CPG, CCM) avec une activité hémolytique sur différentes cibles biologiques
(Parrish et al., 1 993 ; Arzul et al., 1995). L' importance de la fraction des lipides polyinsaturés dans
l' extra it cel lulai re de G. cf. nagasakiense a été
mise à profit pour développer dans cette étude
Toxinogén~
une méthode de détection chimique de la toxicité potentielle des cultures algales à partir de la
proportion relative en lipides polyinsaturés dans
les échanti l lons. L' analyse est effectuée par la
technique chromatographique latroscan (CCMDIF) qui permet, par un choix judicieux des conditions d'élution, un dosage rapide des constituants
lipidiques acylés selon l' importance relative des
structures ca rbonées polyinsaturées et sa turées
(Parrish et al., 1992).
L' acide octadécapentaénoïque a été isolé en
quantité suffisante pour établir des courbes de
calibration d' effets sur d ifférentes cibles biologiques (Arzul et al., 1995). L'activité de cet acide
s'est avérée supéri eure à celle de ses homologues
d' insaturation moindre. Son mode d'action n'est
pas totalement clarifié. Il semble que la molécule
agisse par ses propriétés tensioactives. Sur la base
d' observations cytofluorimétriques, l'action de la
toxine se produirait au niveau des membranes par
création de pores (Gentien et al., 1991 ). La combinaison de l'oxygène avec les chaînes insaturées
pourrait entraîner la formation de peroxydes, responsables des altérations de la perméabi 1 ité
membranaire des cellules (Deby, 1991 ). L'élimination de l' oxygène d' un prélèvement toxique
hémolytique contenant Cymnodinium cf. nagasakiense, lui ôte sa propriété hémolytique. Ceci
montre le rôle de l' oxygène dans l' activité biotox ique de ce d inoflagellé (Arzul et al. in prep.).
Cependant, les capteurs de radicaux oxygène spécifiques aux espèces OH ou 0 2 = SOD, DMU,
Na2S03 ne réduisent que faiblement l' action
hémolytique. Ceci peut s'expliquer par le rôle
oxydant de l' hémoglobine contenue dans les
hématies.
Détermination de la structure
chimique de glycolipides
hémolytiques
Le test hémolytique effectué après la migration sur
plaque CCM révèle la présence dans les glycolipides de l'extrait C. cf. nagasakiense de constituants actifs correspondant notamment à la fraction MGDG (monogalactosyl diacyl glycérol).
Les différentes fractions glycolipidiques ont été
purifiées sur colonne Sep-Pak (si lica plus) et sur
p laque de silice imprégnée de nitrate d' argent
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