CHAPITRE III
MATERIELS ET METHODES
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2.3.4 Dosage des phosphates (PO4 -3 )
2.3.4.1 Principe de la méthode
Le principe du dosage des orthophosphates selon la méthode de MURPHY et
RILEY repose sur la réaction de l’anion orthophosphates (PO4
-3
) avec l’ion molybdate
d’ammonium et l’ion oxydrate de potassium (antimoine) en milieu acide pour la formation
de l’acide phosphomolybdique. Cet acide est réduit par l’acide ascorbique en bleu de
molybdène dont l’absorbance à 885 nm est proportionnelle à la concentration de l’ion
orthophosphate présent dans un échantillon (AMINOT et CHAUSSEPIED, 1983).
2.3.4.2 Réactif exigés
 Réactif 1 : Solution acide d’acide ascorbique.
 Réactif 2 : Solution de molybdène et d’antimoine.
 Acide sulfurique 2.9 mol/l.
 Solution étalon concentrée de phosphate à 5000 µmol/l.
 Solution étalon diluée de phosphate à 50 µmol/l.
Remarque : la préparation des réactifs est décrite en ANNEXE II.
2.3.4.3 Etalonnage
 Introduire de 0.5- 1- 2.5- 5- 10- 25- 50- 100- 250 ml de la solution étalon secondaire et
compléter à 500 ml avec de l’eau distillée soit gamme de concentration de 0.5- 1- 2.55- 10- 25- 50- 100- 250 µmol/l.
 Analyser à 880 nm les différentes solutions, ainsi que le blanc de réactif et le blanc de
l’échantillon.
 La courbe d’étalonnage établit (Figure III. 14) a pour l’équation : y = 0,001x.
Figure III.14:La courbe d'étalonnage des phosphates.
y = 0,001x
R² = 0,998
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0,4
0
50
100
150
200
250
300
Abs
[PO 4
-3 ]µmol/l