Chapitre II : Matériel et méthodes
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Etape 2 : Enrichissement
Il est effectué sur le bouillon au sélénite de sodium (SFB) qui a l’aptitude à favoriser le
développement des entérobactéries pathogènes, tout en inhibant les autres germes d’origine
gastrique (Anonyme, 1986).en transférant à l’aide d’une pipette stérile 1 ml du milieu
liquide pré-enrichi dans 10 ml de milieu liquide sélectif SFB.
Etape 3 : Isolement
Cette étape permet un développement sélectif de colonies présentant les caractéristiques des
salmonelles, elle est réalisée sur le milieu Hecktoen.
A partir de chaque culture en bouillon d’enrichissement une goutte est prélevée et
ensemencée en faisant des stries serrées, pour obtenir des colonies pures et isolées les unes
des autres et incubée à 37°C pendant 24 heures.
Etape 4 : lecture et identification biochimique
La suspicion des salmonelles sur milieu Hecktoen se traduit par des colonies bleutées à
centre noir. (Bourgeois, 1980).
Les colonies suspectes sont repiquées sur le milieu TSI (triple sugar iron), la lecture se fera
après incubation à 37°C pendant 24 heures.
Les tubes TSI présentant une pente rouge (lactose/ saccharose négative), un culot jaune
masqué par une coloration noire, la production d’H2S et la fermentation de glucose avec
production de gaz sont considérés comme positifs, à confirmer par une galerie biochimique.
La présence des salmonelles est confirmée par ONPG négatif, uréase, indole et TDA négatif
et LDC positif.
4.2.7. Recherche des Listeria
4.2.7.1. Définition
Le genre Listeria regroupe des bactéries qui ont en commun les caractères suivants : bacilles
à Gram positif, oxydase négative, catalase positive, aéro-anaérobies, fermentant le glucose,
halophiles, auxotrophes pour de nombreux facteurs de croissance ; mobiles à 30-35°C et non
sporulées. Les Listeria sont responsables de TIAC, le nombre de cas de listériose est
relativement faible car seuls des individus immunodéprimés et les femmes enceintes sont
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Etape 2 : Enrichissement
Il est effectué sur le bouillon au sélénite de sodium (SFB) qui a l’aptitude à favoriser le
développement des entérobactéries pathogènes, tout en inhibant les autres germes d’origine
gastrique (Anonyme, 1986).en transférant à l’aide d’une pipette stérile 1 ml du milieu
liquide pré-enrichi dans 10 ml de milieu liquide sélectif SFB.
Etape 3 : Isolement
Cette étape permet un développement sélectif de colonies présentant les caractéristiques des
salmonelles, elle est réalisée sur le milieu Hecktoen.
A partir de chaque culture en bouillon d’enrichissement une goutte est prélevée et
ensemencée en faisant des stries serrées, pour obtenir des colonies pures et isolées les unes
des autres et incubée à 37°C pendant 24 heures.
Etape 4 : lecture et identification biochimique
La suspicion des salmonelles sur milieu Hecktoen se traduit par des colonies bleutées à
centre noir. (Bourgeois, 1980).
Les colonies suspectes sont repiquées sur le milieu TSI (triple sugar iron), la lecture se fera
après incubation à 37°C pendant 24 heures.
Les tubes TSI présentant une pente rouge (lactose/ saccharose négative), un culot jaune
masqué par une coloration noire, la production d’H2S et la fermentation de glucose avec
production de gaz sont considérés comme positifs, à confirmer par une galerie biochimique.
La présence des salmonelles est confirmée par ONPG négatif, uréase, indole et TDA négatif
et LDC positif.
4.2.7. Recherche des Listeria
4.2.7.1. Définition
Le genre Listeria regroupe des bactéries qui ont en commun les caractères suivants : bacilles
à Gram positif, oxydase négative, catalase positive, aéro-anaérobies, fermentant le glucose,
halophiles, auxotrophes pour de nombreux facteurs de croissance ; mobiles à 30-35°C et non
sporulées. Les Listeria sont responsables de TIAC, le nombre de cas de listériose est
relativement faible car seuls des individus immunodéprimés et les femmes enceintes sont