Chapitre II : Matériel et méthodes
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4.2.1. Préparation des solutions mères et des dilutions
La chair est bien broyée à l’aide d’un hachoir stérilisé, devant le bec bunsen.
On prépare les solutions mères diluées à 10
-1
pour chaque groupe d’âge, en homogénéisant
25 g de la chair broyée dans 225 ml d’eau salée tamponnée stérile.
Ensuite, on prépare des dilutions décimales (solutions filles) pour chaque solution mère, en
introduisant 1ml de chaque solution mère à l’aide d’une pipete graduée stérile, dans des tubes
à vis stériles contenant 9 ml du solvant stérile, puis on mélange soigneusement à l’aide d’un
vortex, c’est la dilution 10
-2 .
De la même façon, on prélève de chaque tube à 10
-2 , 1 ml et on le met dans de nouveaux
tubes contenant 9 ml d’eau physiologique pour obtenir des solutions filles diluées à 10
-3 .
Pour garder les mêmes volumes des prélèvements, on jette 1ml des tubes 10
-3 .
4.2.2. Dénombrement de la flore mésophile totale
4.2.2.1. Définition
La Flore Mésophile Aérobie Totale (FMAT) est un indicateur sanitaire qui permet
d’évaluer le nombre d’Unité Formant Colonie (UFC) présent dans un produit ou sur
une surface.
Cette flore indique le degré de contamination bactérienne globale des aliments (Roberts,
1980) et elle est utilisée comme méthode de contrôle de la qualité hygiénique des produits
alimentaires (Cartier, 1993).
4.2.2.2. Mode opératoire
L’isolement se fait selon les étapes suivantes
- Déposer, devant un bec bunsen, 1 ml de la suspension mère et des dilutions décimales
(10
-2 et 10
-3 ), déjà préparées, dans des boîtes de Pétri stériles.
- Ajouter, par incorporation, 15 ml du milieu gélosé nutritif Plate Count Agar (PCA)
fondue et ramenée à 47°C.
- Mélanger et homogénéiser l’inoculum au milieu par des mouvements de 8 et laisser se
solidifier.
- Recouvrir, l’ensemble ainsi obtenu, d’une deuxième couche dite protectrice de 5 ml du
milieu gélosé nutritif Plate Count Agar (PCA) fondue et ramenée à 47°C.
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4.2.1. Préparation des solutions mères et des dilutions
La chair est bien broyée à l’aide d’un hachoir stérilisé, devant le bec bunsen.
On prépare les solutions mères diluées à 10
-1
pour chaque groupe d’âge, en homogénéisant
25 g de la chair broyée dans 225 ml d’eau salée tamponnée stérile.
Ensuite, on prépare des dilutions décimales (solutions filles) pour chaque solution mère, en
introduisant 1ml de chaque solution mère à l’aide d’une pipete graduée stérile, dans des tubes
à vis stériles contenant 9 ml du solvant stérile, puis on mélange soigneusement à l’aide d’un
vortex, c’est la dilution 10
-2 .
De la même façon, on prélève de chaque tube à 10
-2 , 1 ml et on le met dans de nouveaux
tubes contenant 9 ml d’eau physiologique pour obtenir des solutions filles diluées à 10
-3 .
Pour garder les mêmes volumes des prélèvements, on jette 1ml des tubes 10
-3 .
4.2.2. Dénombrement de la flore mésophile totale
4.2.2.1. Définition
La Flore Mésophile Aérobie Totale (FMAT) est un indicateur sanitaire qui permet
d’évaluer le nombre d’Unité Formant Colonie (UFC) présent dans un produit ou sur
une surface.
Cette flore indique le degré de contamination bactérienne globale des aliments (Roberts,
1980) et elle est utilisée comme méthode de contrôle de la qualité hygiénique des produits
alimentaires (Cartier, 1993).
4.2.2.2. Mode opératoire
L’isolement se fait selon les étapes suivantes
- Déposer, devant un bec bunsen, 1 ml de la suspension mère et des dilutions décimales
(10
-2 et 10
-3 ), déjà préparées, dans des boîtes de Pétri stériles.
- Ajouter, par incorporation, 15 ml du milieu gélosé nutritif Plate Count Agar (PCA)
fondue et ramenée à 47°C.
- Mélanger et homogénéiser l’inoculum au milieu par des mouvements de 8 et laisser se
solidifier.
- Recouvrir, l’ensemble ainsi obtenu, d’une deuxième couche dite protectrice de 5 ml du
milieu gélosé nutritif Plate Count Agar (PCA) fondue et ramenée à 47°C.