Chapitre III : MATERIEL ET METHODES
53
La préparation des standards est effectuée à partir d’une solution mère d’une concentration de
100µg/ml, obtenue à partir de la dissolution de 1mg de chrysène dans 10 ml d’Hexane. A partir
de cette solution, des dilutions sont réalisées pour aboutir à une gamme d'étalonnage préparé
selon le principe de neutralisation :
C 1 V 1 =C 2 V 2
Ainsi, Des volumes de 10, 20, 50, 80, 100 μl sont prélevés de la solution mère à l’aide d’une
micropipette, et dilués dans 10 ml d’Hexane afin d’obtenir des solutions filles dont les
concentrations sont mentionné dans le tableau suivant (Tableau III.3).
Les fioles contenant les solutions standards sont placées dans un bac à ultrasons pendant deux
minutes pour leur assurer une bonne homogénéisation.
Tableau III.3 : Concentrations de la gamme d'étalonnage
Standards
S1
S2
S3
S4
S5
Concentrations (C 2 ) (μg/ml)
0,1
0,2
0,5
0,8
1
5.1.4.4. Mesure des intensités de fluorescence (IF)
La lecture des intensités de fluorescence (IF) nécessite les conditions suivantes :
Une longueur d’onde d’excitation de 310 nm ;
L’émission de fluorescence est mesurée entre 310 et 500 nm pour des longueurs
d’ondes d’émission fixées à 360 nm, 380nm et 410 nm avec un pic d’absorption
maximale à 360 nm pour les hydrocarbures aromatiques ;
Ouverture des fentes d’excitation et d’émission respectivement égale à 2 nm et 5
nm ;
L’extrait doit être placé dans une cuve en quartz de 1 cm de trajet optique.
On fait passer tous les standards et les échantillons ainsi que l’Hexane dans l’appareil et on fait la
lecture de l’Intensité de Fluorescence (IF).
En utilisant les résultats de la gamme d’étalonnage, on trace une droite d’étalonnage IF=f (C).
L’intensité de fluorescence (IF) est proportionnelle à la concentration (C).
Cette droite d’étalonnage a la forme suivante :
IF : intensité de fluorescence en unité arbitraire (UA) ;
C : concentration en HAP (en μg/ml) ;
a : pente de la droite ;
b : ordonnée à l’origine.
53
La préparation des standards est effectuée à partir d’une solution mère d’une concentration de
100µg/ml, obtenue à partir de la dissolution de 1mg de chrysène dans 10 ml d’Hexane. A partir
de cette solution, des dilutions sont réalisées pour aboutir à une gamme d'étalonnage préparé
selon le principe de neutralisation :
C 1 V 1 =C 2 V 2
Ainsi, Des volumes de 10, 20, 50, 80, 100 μl sont prélevés de la solution mère à l’aide d’une
micropipette, et dilués dans 10 ml d’Hexane afin d’obtenir des solutions filles dont les
concentrations sont mentionné dans le tableau suivant (Tableau III.3).
Les fioles contenant les solutions standards sont placées dans un bac à ultrasons pendant deux
minutes pour leur assurer une bonne homogénéisation.
Tableau III.3 : Concentrations de la gamme d'étalonnage
Standards
S1
S2
S3
S4
S5
Concentrations (C 2 ) (μg/ml)
0,1
0,2
0,5
0,8
1
5.1.4.4. Mesure des intensités de fluorescence (IF)
La lecture des intensités de fluorescence (IF) nécessite les conditions suivantes :
Une longueur d’onde d’excitation de 310 nm ;
L’émission de fluorescence est mesurée entre 310 et 500 nm pour des longueurs
d’ondes d’émission fixées à 360 nm, 380nm et 410 nm avec un pic d’absorption
maximale à 360 nm pour les hydrocarbures aromatiques ;
Ouverture des fentes d’excitation et d’émission respectivement égale à 2 nm et 5
nm ;
L’extrait doit être placé dans une cuve en quartz de 1 cm de trajet optique.
On fait passer tous les standards et les échantillons ainsi que l’Hexane dans l’appareil et on fait la
lecture de l’Intensité de Fluorescence (IF).
En utilisant les résultats de la gamme d’étalonnage, on trace une droite d’étalonnage IF=f (C).
L’intensité de fluorescence (IF) est proportionnelle à la concentration (C).
Cette droite d’étalonnage a la forme suivante :
IF : intensité de fluorescence en unité arbitraire (UA) ;
C : concentration en HAP (en μg/ml) ;
a : pente de la droite ;
b : ordonnée à l’origine.