Matériels et méthodes
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- On pèse les ballons remplis, soit P ce poids.
2.4.2.4 Expression des résultats
La quantité des lipides totaux est calculée selon la formule suivante :
% lipides =
𝑴
𝒎
* 100
Où : M : quantité des lipides (P – P0) en g.
P : poids du ballon rempli de lipides en g.
P0 : poids du ballon vide en g.
m : poids de l’échantillon en g.
2.4.3. Dosage des glucides
Le dosage des sucres totaux solubles est réalisé par la méthode de phénol-sulfurique (Dubois et
al., 1956).
2.4.3.1. Présentation de la méthode
Pour la détermination des glucides totaux, nous avons utilisé la méthode de phénol-sulfurique
(Dubois et al., 1956), qui est une méthode colorimétrique devient du Test de Molish pour les
glucides, et impliquent le réchauffement du matériel avec de l’acide sulfurique H2SO4 concentré
et une action avec le phénol. Le phénol est un alcool qui réagit fortement avec les glucides. La
réaction de couleur est linéaire à la longueur d’onde de 485nm.
2.4.3.2. Mode opératoire :
- Peser 3mg d’échantillon lyophilisé.
- Ajouter 4ml de NaOH 1N. Vortexer et passer aux ultrasons 30 secondes au froid.
- Diviser en 3 tubes avec 1ml par tube.
- Ajouter 25µl de phénol à 80% et agiter immédiatement, après ajouter 2.5ml d’H2SO4 et
agiter. (Faire la même opération pour chaque tube).
- Laisser refroidir à température ambiante pendant 30 minutes.
- Lire à 485 nm, avant 2 heures par spectrophotométrie
2.4.3.3. Solution de référence
Faire une solution mère de glucose 1mg/ml en NaOH
Préparer les points de gamme :
Glucose (µl)
0
200
400
600
800
1000
V. NaOH (µl)
1000
800
600
400
200
0
Concentration(µg/ml)
0
20
40
60
80
100
Une courbe d’étalonnage est effectuée à partir d’une solution de glucose (Figure 10, Annexe1).