Chapitre III : Matériel et Méthodes
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Les étapes doivent être faites dans l’obscurité et sont comme suit :
 Congélation
La partie dorsale gauche de l’espèce a été coupé par un bistouri et récupéré dans un pilulier en
verre conditionné et étiqueté, puis congelé à -18°C pour éviter toutes contaminations et
inhiber toutes réactions chimiques, de dégradation et d’évaporation des hydrocarbures.
 Lyophilisation
Les échantillons congelés sont lyophilisés à -50°C / 0,1atm/48H par un appareil CHRIST
BETTA 1-8, pour éliminer toute gouttelette d’eau de la chair, puis conservés dans un
dessiccateur jusqu’au jour de l’analyse.
 Broyage et homogénéisation
Après être lyophilisés, les échantillons sont ensuite broyés par un mixeur pour permettre de
réduire la taille des particules et la bonne pénétration du solvant lors de l’extraction.
Les poudres obtenues peuvent être conservés pendant environ 1 mois dans un dessiccateur
(AMINOT, et al., 1983).
 Extraction des HAP du biote : Extraction solide-liquide
L’extraction est une opération de transfert ou d’échange de matière entre une phase solide qui
contient la matière à extraire et une phase liquide, le solvant d’extraction.
L’extraction des hydrocarbures du biote se fait à l’aide d’un extracteur Soxhlet, composé de
quatre postes, muni chacun par un réfrigérant, un matras comme support de la cartouche, un
ballon pour récupérer le solvant et d’une plaque chauffante comme source de chaleur. Ce
procédé permet un excellent rendement.
Les étapes de l’extraction solide-liquide sont :
 Pesée de 2g d’échantillon de biote avec une balance de précision ;
 Mise du poids dans une cartouche avec un peu de Na 2 SO 4 pour l’élimination des
gouttelettes d’eau et d’humidité qui peuvent être introduites dans l’échantillon après
lyophilisation;
 Mise des cartouches dans les matras ;
 Mise des « Boiling chips » (ou grains d’homogénéisation) dans les ballons pour
homogénéiser le solvant puis remplissage de l’extracteur par un mélange d’hexane et