Chapitre II
MATERIEL ET METHODES
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Les germes recherchés les coliformes totaux, fécaux, E. coli, streptocoques fécaux, les
staphylocoques, ainsi que les vibrions et les salmonelles.
4.1 Dénombrement par la technique de filtration sur membrane
La méthode de filtration sur membrane consiste à recueillir, sur une membrane stérile de porosité
0,45µm. un volume donné de produit à analyser, la membrane est ensuite déposée sur un milieu
nutritif ; après incubation, les colonies sont dénombrées (CHAMPIAT et al, 1994).
La technique de filtration sur membrane est la méthode de dénombrement la plus utilisée au
laboratoire pour sa facilité et sa performance et sa reproductibilité.
 Matériel
- Dispositif de filtration de marque « Sartorius » ;
- Pompe à vide ;
- Bec-Bunsen pour la stérilisation de lazone de travail ;
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, quadrillées et stériles de marque « Millipore » a
emballage individuel, de porosité 0,45µm et de 47 mm de diamètre, susceptibles
de retenir les bactéries ;
- Boites de Pétri contenant les milieux de culture spécifiques pour chaque germe ;
- Pinces stérilisées ;
- Pipettes ;
- Deux Incubateurs (Étuves) dont la température varie selon le germe étudié.
 Mode opératoire
La procédure de filtration sur membrane pour la recherche et le dénombrement
de bactéries dans l’eau de mer est comme suit :
- Nettoyer la paillasse à l’eau de Javel avec présence d’un Bec-Bunsen ;
- Rincer à l’eau distillé et stériliser l’équipement de filtration (la plaque poreuse)par
flambage ;
- fermer le robinet du support ;
- Mettre en marche la pompe à vide ;
- Prélever une membrane stérile en la saisissant par son bord extérieur, avecune pince
flambée et refroidie ;
- Déposer la membrane sur la plaque poreuse ;
- L’entonnoir flambé et refroidi est placé au-dessous de la membrane ;