Chapitre V
Matériels et méthodes
70
Les entérocoques utilisent leur enzyme la beta glucosidase pour métaboliser le MUD (4methyl-umbelliferyl β-D-glucoside : substrat spécifique pour l’identification des
entérocoques) et produire une fluorescence
Principe de dénombrement
Selon la technique de NPP (nombre le plus probable) fondée sur la méthode statistique
du maximum de vraisemblance permet une estimation de la concentration bactérienne d’une
eau.
Lecture et l’expression des résultats :
On dénombre le puits positifs de la manière suivante :
Colilert18
Puits couleur jaune : bactérie coliforme
Puits couleur jaune/fluorescence bleu sous U.V :E. coli (figure V.1)
Enterolert-E
Puits bleu fluorescence sous U.V : Entérocoque intestinaux
Ces résultats se rapportent à la table NPP le nombre de puits positifs permet d’extrapoler le
nombre le plus probable et les limites de confiance a 95%(figure V.1)
V.4.3) Recherche des sulfito-reductrices
Les clostridium sulfito-reductrices sont souvent considères comme des témoins de pollution
fècale.la forme spore est beaucoup plus résistantes que les autres formes
Principe
Rétention des spores de bactéries sur le filtre de porosité 0,22 µm, après destruction des
formes végétatives par chauffage de l’échantillon à 75 ± 5°C (bain-marie) pendant
15min ;
Incubation de la membrane sur milieu gélosé Viande-Foie (ou milieu gélosé Tryptose
sulfite) additionné d’une ampoule de sulfite de sodium et une ampoule d’alun de fer
pendant 22±2h et 44 ±4h à 37°C ;
Dénombrement des colonies noires. Cette coloration est dus à la réduction des sulfites en
sulfures par action des bactéries, ces sulfures réagissent avec le fer et donnent la couleur
noire
Matériels et méthodes
70
Les entérocoques utilisent leur enzyme la beta glucosidase pour métaboliser le MUD (4methyl-umbelliferyl β-D-glucoside : substrat spécifique pour l’identification des
entérocoques) et produire une fluorescence
Principe de dénombrement
Selon la technique de NPP (nombre le plus probable) fondée sur la méthode statistique
du maximum de vraisemblance permet une estimation de la concentration bactérienne d’une
eau.
Lecture et l’expression des résultats :
On dénombre le puits positifs de la manière suivante :
Colilert18
Puits couleur jaune : bactérie coliforme
Puits couleur jaune/fluorescence bleu sous U.V :E. coli (figure V.1)
Enterolert-E
Puits bleu fluorescence sous U.V : Entérocoque intestinaux
Ces résultats se rapportent à la table NPP le nombre de puits positifs permet d’extrapoler le
nombre le plus probable et les limites de confiance a 95%(figure V.1)
V.4.3) Recherche des sulfito-reductrices
Les clostridium sulfito-reductrices sont souvent considères comme des témoins de pollution
fècale.la forme spore est beaucoup plus résistantes que les autres formes
Principe
Rétention des spores de bactéries sur le filtre de porosité 0,22 µm, après destruction des
formes végétatives par chauffage de l’échantillon à 75 ± 5°C (bain-marie) pendant
15min ;
Incubation de la membrane sur milieu gélosé Viande-Foie (ou milieu gélosé Tryptose
sulfite) additionné d’une ampoule de sulfite de sodium et une ampoule d’alun de fer
pendant 22±2h et 44 ±4h à 37°C ;
Dénombrement des colonies noires. Cette coloration est dus à la réduction des sulfites en
sulfures par action des bactéries, ces sulfures réagissent avec le fer et donnent la couleur
noire