Chapitre II : Matériel et méthodes 2018
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 Membranes d’ester de cellulose quadrillées et stériles de porosité de 0.45µm et de 47 mm de
diamètre ;
 Pinces stérilisées et pipettes.
b. Mode opératoire
 Stériliser le dispositif de filtration ;
 Mettre le filtre sur la grille ;
 Filtrer le volume nécessaire de l’échantillon (par rapport au germe recherché) ;
Déposé le filtre sur le milieu de culture adapté pour chaque germe ; la composition des milieux de culture
utilisés est consignée en annexe 2 ;
 Incuber les boites à température adéquate.
II.2.1.5.1.Dénombrement des coliformes totaux et Coliformes thermotolérants « Fécaux »
Après filtration de l’eau à étudier, la membrane est déposée sur un milieu gélosé approprié. Ceci permet aux
colonies de coliformes de se développer préférentiellement au cours d’une incubation de 18 à 24 heures.
Cette méthode conduit à un dénombrement présomptif des colonies des coliformes totaux et coliformes
thermotolérants. Le nombre de colonies trouvées sera exprimés en Unité Format Colonie dans 100 ml d’eau
filtrée (UFC/100ml). Il est généralement beaucoup moins abondant dans la boîte incubée à 44°C. (Rodier et
al, 2009) (Figure 12).
Pour la recherche d’Echirichia coli, on prend une colonie jaune orangé à l’aide d’une anse de platine stérile
et ensemencé dans des tubes contenants 9 ml d’eau peptoné exempte d’indole (EPE), in cuber à 44
℃pendant 24 heures.( Figure 13)
Figure 11. Coupe schématique d’un appareil de filtration sur membrane (Rodier et al,
2009).