ІІ. Matériel et méthodes
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laboratoire, pour sa facilité et sa reproductibilité. Elle consiste en une filtration de l’eau sur des
membranes de porosité 0.45 µm susceptible de retenir
les bactéries avec un quadrillageen surface facilitant les dénombrements.
a) Matériel :
- Dispositif de filtration de marque « Sartoriusstedim » (Figure10)
- Bec-Bunsen pour garder tout au long de la
manipulation la zone de travail stérile ;
- Boites de Pétri avec les milieux de culture
Spécifiques pour les germes ;
- Membranes d’ester de cellulose, filtrantes,
quadrillées et stériles (en emballage individuel)
de porosité de 0.45 µm et de 47 mm de
diamètre susceptibles de retenir les bactéries.
- Deux incubateurs (Etuves : une à 37 C° et
l’autre à 44 C°) ;
- Pompe à vide ;
- Pinces stérilisées ;
- Micro-pipette et cônes stérilisées ;
- Flacons d’eau distillée stériles pour effectuer les dilutions
b) Mode opératoire :
- Stériliser le dispositif de filtration (avec de l’alcool et le bec-bunsen) ;
- Mettre en place le dispositif ;
- Mettre le filtre sur la grille ;
- Filtrer un volume d’échantillon (100 ml) ;
- Déposer le filtre sur le milieu de culture gélose au tergitol);
- Incuber les boites à la température adéquate 37°C pour les coliformes et 44°C pour
les coliformes thermotolérants;
La composition de milieu de culture et des réactifs utilisés est consignée en annexe 1.Cette
méthode conduit à un dénombrement des coliformes totaux et des coliformes thermotolérants.
Le nombre de colonies trouvées sera exprimé en Unité Formant Colonie dans 100 ml d’eau
analysée (UFC/100 ml). (Figure 11).
Figure 10 : Dispositif de filtration.