2-4-5- Dosage de la chlorophylle a
Principe de la méthode (dosage de la chlorophylle a par spectrophotométrie)
La méthode consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le filtre sera ensuite
immergé dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments, puis, on mesure
l’absorbance avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied, 1983).
Mode opératoire
Les échantillons d’eau (environ 25O ml) sont filtrés sur des disques filtrants en fibre
de verre (Wattman GF/C , diamètre 47 mm). On dépose 1 à 2 ml de suspension de
carbonate de magnésium à 1% avant la filtration, ce qui permettra d’améliorer la
rétention sur les filtres et pour éviter une acidification des matières filtrées avant et
pendant l’extraction (Aminot et Kérouel, 2004).
Chaque filtre est ensuite plié, mis dans du papier aluminium (portant le numéro de
l’échantillon et la date de prélèvement) et immédiatement congelé à –20° C.
L’extrait et le dosage de la chlorophylle a est réalisé selon la méthode de Lorenzen
(1967) in (Aminot et Chaussepied, 1983).
Avant la décongélation des filtres, l’extraction des pigments s’effectue dans des tubes
en verre contenant 10 ml d’acétone à 90%. Ces tubes sont recouverts par du papier
aluminium et sont immédiatement placés au réfrigérateur (environ 4° C) pendant 24
heures.
L’absorbance de l’extrait pigmentaire dans le solvant est ensuite estimée avant (A
na ) et
après acidification (A
a
) avec 50 µl d’acide chlorhydrique (HCl à 0,5 N).
Les lectures d’absorbances sont effectuées sur un spectrophotomètre aux longueurs
d’ondes 665 mm et 750 mm avant et après acidification.
Le calcul des concentrations de la chlorophylle a se fait à partir de l’équation de
Lorenzen (1967) in (Aminot et Chaussepied, 1983) :
na
a
26,7 (A 665 – A 665 ) . v
[Chlorophylle a] (mg/m
3 ) =
V.l
V : volume d’eau filtrée (l).
v : volume de solvant d’extraction (ml).
l : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm).
na
A 665 : absorbance nette corrigée (avant acidification).
a
A 665 : absorbance nette corrigée (après acidification).
Principe de la méthode (dosage de la chlorophylle a par spectrophotométrie)
La méthode consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le filtre sera ensuite
immergé dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments, puis, on mesure
l’absorbance avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied, 1983).
Mode opératoire
Les échantillons d’eau (environ 25O ml) sont filtrés sur des disques filtrants en fibre
de verre (Wattman GF/C , diamètre 47 mm). On dépose 1 à 2 ml de suspension de
carbonate de magnésium à 1% avant la filtration, ce qui permettra d’améliorer la
rétention sur les filtres et pour éviter une acidification des matières filtrées avant et
pendant l’extraction (Aminot et Kérouel, 2004).
Chaque filtre est ensuite plié, mis dans du papier aluminium (portant le numéro de
l’échantillon et la date de prélèvement) et immédiatement congelé à –20° C.
L’extrait et le dosage de la chlorophylle a est réalisé selon la méthode de Lorenzen
(1967) in (Aminot et Chaussepied, 1983).
Avant la décongélation des filtres, l’extraction des pigments s’effectue dans des tubes
en verre contenant 10 ml d’acétone à 90%. Ces tubes sont recouverts par du papier
aluminium et sont immédiatement placés au réfrigérateur (environ 4° C) pendant 24
heures.
L’absorbance de l’extrait pigmentaire dans le solvant est ensuite estimée avant (A
na ) et
après acidification (A
a
) avec 50 µl d’acide chlorhydrique (HCl à 0,5 N).
Les lectures d’absorbances sont effectuées sur un spectrophotomètre aux longueurs
d’ondes 665 mm et 750 mm avant et après acidification.
Le calcul des concentrations de la chlorophylle a se fait à partir de l’équation de
Lorenzen (1967) in (Aminot et Chaussepied, 1983) :
na
a
26,7 (A 665 – A 665 ) . v
[Chlorophylle a] (mg/m
3 ) =
V.l
V : volume d’eau filtrée (l).
v : volume de solvant d’extraction (ml).
l : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm).
na
A 665 : absorbance nette corrigée (avant acidification).
a
A 665 : absorbance nette corrigée (après acidification).