Chapitre III
Matériel et méthodes
41
I.6.3.1. Lyophilisation
Après la congélation, les échantillons sont placés directement dans le lyophilisateur pendant
48H à -45°C de température et sous pression réduite (10
-1
bar).
La lyophilisation est la déshydratation par sublimation des échantillons à basse température
(–40°C) pour le passage de la phase solide vers la phase vapeur sans passer par la phase
liquide et sous vide (0,1bar) pendant 48 h par un lyophilisateur (modèle CHRIST Betta 1-8).
C’est une technique plus approprié par rapport au séchage à l’étuve qui présente un risque de
perte de certains composés volatils et une source d’altération de l’échantillon.
I.6.3.2. Le broyage
Les échantillons lyophilisés sont ensuite broyés à l’aide d’un mortier en porcelaine qui doit
être conditionné au paravent et entre deux échantillons différents :
Lavé avec le détergent, rincé avec l’eau de robinet puis avec l’eau bi distillée, séché à l’étuve
à 120°C puis conditionné avec l’hexane.
Le broyage a pour but d’homogénéiser l’échantillon. Ce dernier est remis dans le pilulier et
peut alors être conservé sans disposition particulière pendant des années.
I.6.3.3. L’extraction des hydrocarbures
L’extraction est réalisée à l’aide d’un extracteur soxhlet.
Un blanc de procédure est réalisé pour chaque série (4 échantillons).
Cinq grammes de sédiment lyophilisé sont introduits dans une cartouche en cellulose (28mm
x100mm).
Un mélange binaire de solvants d’hexane et de dichlorométhane (200ml) dans des proportions
égales en volumes introduit dans le ballon assure l’extraction des hydrocarbures. Quelques
grains de « BOILING CHIPS » sont ajoutés dans le mélange.
L’extraction dure 8 heures.
I.6.3.4. Concentration des extraits
Environ 120ml de l’extrait récupéré est concentré à un volume de 10ml avec l’évaporateur
rotatif (Température : 40°C, Pression : 1,5 bars).
Puis jusqu’à un volume de 2ml sous jet d’azote.
Matériel et méthodes
41
I.6.3.1. Lyophilisation
Après la congélation, les échantillons sont placés directement dans le lyophilisateur pendant
48H à -45°C de température et sous pression réduite (10
-1
bar).
La lyophilisation est la déshydratation par sublimation des échantillons à basse température
(–40°C) pour le passage de la phase solide vers la phase vapeur sans passer par la phase
liquide et sous vide (0,1bar) pendant 48 h par un lyophilisateur (modèle CHRIST Betta 1-8).
C’est une technique plus approprié par rapport au séchage à l’étuve qui présente un risque de
perte de certains composés volatils et une source d’altération de l’échantillon.
I.6.3.2. Le broyage
Les échantillons lyophilisés sont ensuite broyés à l’aide d’un mortier en porcelaine qui doit
être conditionné au paravent et entre deux échantillons différents :
Lavé avec le détergent, rincé avec l’eau de robinet puis avec l’eau bi distillée, séché à l’étuve
à 120°C puis conditionné avec l’hexane.
Le broyage a pour but d’homogénéiser l’échantillon. Ce dernier est remis dans le pilulier et
peut alors être conservé sans disposition particulière pendant des années.
I.6.3.3. L’extraction des hydrocarbures
L’extraction est réalisée à l’aide d’un extracteur soxhlet.
Un blanc de procédure est réalisé pour chaque série (4 échantillons).
Cinq grammes de sédiment lyophilisé sont introduits dans une cartouche en cellulose (28mm
x100mm).
Un mélange binaire de solvants d’hexane et de dichlorométhane (200ml) dans des proportions
égales en volumes introduit dans le ballon assure l’extraction des hydrocarbures. Quelques
grains de « BOILING CHIPS » sont ajoutés dans le mélange.
L’extraction dure 8 heures.
I.6.3.4. Concentration des extraits
Environ 120ml de l’extrait récupéré est concentré à un volume de 10ml avec l’évaporateur
rotatif (Température : 40°C, Pression : 1,5 bars).
Puis jusqu’à un volume de 2ml sous jet d’azote.