Annexes
 Les tubes sont ensuite bouchés et placés à l’obscurité dans un réfrigérateur (5 °C),
pour une période d'extraction de 30 minutes ;
 Homogénéiser les échantillons on les plaçant dans une centrifugeuse pendant 5 min et
3000 tours/min ;
 Calibrer le spectrophotomètre fluorescence à l’aide d’une série de cinq standards, et
un blanc du méthanol ;
 Remplir la cuvette en quartz avec l’échantillon et prendre la lecture fluorimétrique
IF0 ;
 Acidifier l’échantillon avec 10 µl de HCl de 0.5N et prendre de nouveau une lecture
fluorimétrique IFa ;
 Rincer la cuvette avec le méthanol, avant de faire une nouvelle mesure ;
 Éviter d’exposer les échantillons à la lumière et procéder le plus rapidement possible
afin de minimiser la dégradation de la chlorophylle a par la lumière et la chaleur.
2.5. Calcul des concentrations
Les résultats fournis ne concernent donc que la chlorophylle a calculée d'après la formule
suivante qui néglige la présence des phaeopigments:
Chl (µg/l) = F 0 /K 0 x v/V ………………………………………………………………. (A.2)
- F 0 : Valeur de fluorescence,
- K 0 : Coefficient d'étalonnage établie avec de la chlorophylle a pure (Sigma C5753),
- V : Volume filtré (250 ml) et v : volume d'extraction (7 ml).
3. Dosage de la DBO 5
Tableau A.2.1: Tableau de sélections du volume pour le DBO
Volum (ml)
Marge de mesure (mg/l)
Facteurs
432
0-40
1
365
0-80
2
250
0-200
5
164
0-400
10
97
0-800
20
43,5
0-2000
50
22,7
0-4000
100