Annexes
2. Dosage de la chlorophylle a par fluorométrie
La concentration en chlorophylle a a été déterminée selon la méthode fluorimétrique de
Yenstch et Menzel (1963) adaptée par Holm-Hansen et Rieman (1978) pour l'extraction des
pigments à l'aide du méthanol. Le protocole utilisé au cours de la campagne a été décrit par
Herbland et al. (1985).
2.1. Principe de la méthode de dosage
Le phytoplancton est recueilli sur un filtre en fibre de verre (GF/F, de porosité environ
0,45μm et de diamètre 25mm) et repris dans une solution de méthanol. Les pigments
chlorophylliens sont excités par un faisceau lumineux à 450 nm. La fluorescence émise est
mesurée à 670 nm.
2.2. Appareillage et matériel
Le matériel utilisé doit être exempt de toute trace de contaminant organique, inorganique ou
biologique. Une procédure de lavage adéquate est de rigueur.
Equipement de filtration de marque « Sartorius stedim » avec filtres en fibre de verre
(GF/F, de porosité environ 0,45μm et de diamètre 25mm).
Tubes de mesure en verre.
Centrifugeuse Hettich ZENTRIFUGEN de type EBA 30, avec 12 postes de porteFiltre.
Spectrophotomètre fluorescence de marque HITACHI, modèle 650 S, équipé d’une
lampe « Xénon » qui est la source du rayonnement UV.
Cuve en quartz de 1 cm de trajet optique, pinces, éprouvettes.
2.3. Réactifs et étalons
Solution de méthanol pur à 99.7% pour l’extraction.
Solution de carbonate de magnésium (MgCO3) à 1% (Ajouter 1 g de MgCO3 en
poudre fine dans 100 ml d’eau déminéralisée).
Solution mère de chlorophylle a à une concentration de 0.1 μg/l (conserver au
congélateur)
Solutions étalons de chlorophylle a dans méthanol 99.7 %, à des concentrations de 2,
5,10, 15, 20 μg/l.
Acide chlorhydrique (HCL) 0,5 N.
2.4. Protocole analytique
Appliquer 2 ml de solution de carbonate de magnésium sur une membrane (Whatman
GF/F) de 0,45 μm, et filtrer 250ml de l’échantillon avec une pression inférieure à 100
mmHg ;
Le filtre est plié sur quatre et enrobé dans du papier aluminium déjà étiqueté. Ensuite
les filtres sont conservés dans un congélateur ;
Ajouter 6 ml de méthanol à 99.7 % dans les tubes qui contiennent les échantillons à
doser ;
2. Dosage de la chlorophylle a par fluorométrie
La concentration en chlorophylle a a été déterminée selon la méthode fluorimétrique de
Yenstch et Menzel (1963) adaptée par Holm-Hansen et Rieman (1978) pour l'extraction des
pigments à l'aide du méthanol. Le protocole utilisé au cours de la campagne a été décrit par
Herbland et al. (1985).
2.1. Principe de la méthode de dosage
Le phytoplancton est recueilli sur un filtre en fibre de verre (GF/F, de porosité environ
0,45μm et de diamètre 25mm) et repris dans une solution de méthanol. Les pigments
chlorophylliens sont excités par un faisceau lumineux à 450 nm. La fluorescence émise est
mesurée à 670 nm.
2.2. Appareillage et matériel
Le matériel utilisé doit être exempt de toute trace de contaminant organique, inorganique ou
biologique. Une procédure de lavage adéquate est de rigueur.
Equipement de filtration de marque « Sartorius stedim » avec filtres en fibre de verre
(GF/F, de porosité environ 0,45μm et de diamètre 25mm).
Tubes de mesure en verre.
Centrifugeuse Hettich ZENTRIFUGEN de type EBA 30, avec 12 postes de porteFiltre.
Spectrophotomètre fluorescence de marque HITACHI, modèle 650 S, équipé d’une
lampe « Xénon » qui est la source du rayonnement UV.
Cuve en quartz de 1 cm de trajet optique, pinces, éprouvettes.
2.3. Réactifs et étalons
Solution de méthanol pur à 99.7% pour l’extraction.
Solution de carbonate de magnésium (MgCO3) à 1% (Ajouter 1 g de MgCO3 en
poudre fine dans 100 ml d’eau déminéralisée).
Solution mère de chlorophylle a à une concentration de 0.1 μg/l (conserver au
congélateur)
Solutions étalons de chlorophylle a dans méthanol 99.7 %, à des concentrations de 2,
5,10, 15, 20 μg/l.
Acide chlorhydrique (HCL) 0,5 N.
2.4. Protocole analytique
Appliquer 2 ml de solution de carbonate de magnésium sur une membrane (Whatman
GF/F) de 0,45 μm, et filtrer 250ml de l’échantillon avec une pression inférieure à 100
mmHg ;
Le filtre est plié sur quatre et enrobé dans du papier aluminium déjà étiqueté. Ensuite
les filtres sont conservés dans un congélateur ;
Ajouter 6 ml de méthanol à 99.7 % dans les tubes qui contiennent les échantillons à
doser ;