Chapitre 3 : Matériel et méthodes
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Figure 13: évaporateur rotatif BUCHI R110
2.5.3 Purification
Le solvant organique utilisé piège non seulement les hydrocarbures mais aussi tous les
composés organiques polaires tels que les lipides et les acides gras. Afin d'éliminer ces derniers
et d'isoler les hydrocarbures, une purification est réalisée par le biais d'une chromatographie
d'adsorption sur colonne ouverte. Une colonne en verre de 30ml de volume avec un diamètre
interne de 10mm contenant la phase stationnaire, 5g de Florisil (100-200 mesh ASTM)
conditionne, est préparée. Elle est garnie à l’extrémité supérieure par du sulfate de sodium. Le
Florisil est maintenu à l’extrémité inferieure par de la soie de verre. La préparation de la colonne
se fait par la méthode humide. L'adsorbant est préalablement mélangé au solvant. Cette solution
est ensuite introduite dans la colonne. L’élution est effectuée avec 20ml d'hexane. L'éluat
récupéré a un volume final de 20ml.
2.5.4 Concentration
Une seconde concentration, très délicate cette fois-ci à cause du faible volume final est
réalisée. En effet, l’échantillon est évaporé à sec sous jet d’azote et repris avec 5ml d’hexane.
Le protocole de la C.O.I (1984) souligne le risque de perte au-dessous d’un volume de 200µl.
Figure 14: concentration sous jet d’azote
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Figure 13: évaporateur rotatif BUCHI R110
2.5.3 Purification
Le solvant organique utilisé piège non seulement les hydrocarbures mais aussi tous les
composés organiques polaires tels que les lipides et les acides gras. Afin d'éliminer ces derniers
et d'isoler les hydrocarbures, une purification est réalisée par le biais d'une chromatographie
d'adsorption sur colonne ouverte. Une colonne en verre de 30ml de volume avec un diamètre
interne de 10mm contenant la phase stationnaire, 5g de Florisil (100-200 mesh ASTM)
conditionne, est préparée. Elle est garnie à l’extrémité supérieure par du sulfate de sodium. Le
Florisil est maintenu à l’extrémité inferieure par de la soie de verre. La préparation de la colonne
se fait par la méthode humide. L'adsorbant est préalablement mélangé au solvant. Cette solution
est ensuite introduite dans la colonne. L’élution est effectuée avec 20ml d'hexane. L'éluat
récupéré a un volume final de 20ml.
2.5.4 Concentration
Une seconde concentration, très délicate cette fois-ci à cause du faible volume final est
réalisée. En effet, l’échantillon est évaporé à sec sous jet d’azote et repris avec 5ml d’hexane.
Le protocole de la C.O.I (1984) souligne le risque de perte au-dessous d’un volume de 200µl.
Figure 14: concentration sous jet d’azote