MATERIELS ET METHODES
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II.2.4.7. Electrophorèse sur gel d’agarose
Les produits d’amplification sont soumis à une électrophorèse sur gel d’agarose 1%, sous
une tension de 50V pendant 1heure. La visualisation se fait sous UV en utilisant le bromure
d’éthidium (0,5µg/ml).
Cette méthode a pour principe la séparation, l’identification et la purification de
l’ADN chargé négativement. La migration de l’ADN dans le gel d’agarose, soumis à un
champ électrique dépend des paramètres suivants (Sambrook et al., 1989) : le poids
moléculaire, la concentration d’agarose dans le gel, la conformation de l’ADN, le voltage
appliqué et la composition du tampon d’électrophorèse.
Technique
préparation d’un gel d’agarose 1% dans du tampon TBE 1X, additionné de bromure
d’éthidium (0.5µg/ml),
Déposer l’échantillon à analyser additionné de bleu de dépôt à raison de 1µl pour 5µl
d’ADN,
Appliquer un champ électrique à un voltage de 25V/cm,
Visualiser l’ADN sous UV à 254nm.
Solution employée
Tampon TBE 10X (pH 8,3, autoclavé et conservé à température ambiante) :
890mM de tris base.
890mM d’acide borique.
19 mM d’EDTA.
Bleu de dépôts :
glycérol 50%
EDTA-NA 2 100mM pH : 8
Bleu de bromophénol 0.2%
Sodium dodécyl sulfate (SDS) 3%.