MATERIELS ET METHODES
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II.2.4.4. Détection des β
β β
β-lactamases à spetre élargi (BLSE) : test de synergie
La détection d’une BLSE a été réalisée en parallèle avec l’antibiogramme par la
méthode de diffusion en milieu solide. Ce test est basé sur la mise à profit d’une image de
synergie entre au moins une céphalosporine 3
ième génération (C3G) et/ou l’aztréonam et un
inhibiteur de β-lactamases tel que l’acide clavulanique. Cette synergie se traduit par une
augmentation nette de l’activité des C3G et/ou l’aztréonam du côté de l’inhibiteur (acide
clavulanique) (Jarlier et al., 1988 ; Vedel, 2005).
II.2.4.5. Transfert génétique par conjugaison bactérienne
Principe
Le transfert génétique permet la mise en évidence de plasmides conjugatifs portants
des caractères de résistance aux antibiotiques. Il se fait par un croisement de la souche
sauvage (donatrice) avec une souche réceptrice (ex : E. coli J53 RA
R , ou E.coli k12 NA
R )
dépourvue de plasmide et possédant dans ce cas, un caractère de résistance obtenu par
mutation chromosomique (Rifampicine ou alors l’acide nalidixique), auquel la donatrice est
sensible.
Les bactéries réceptrices ayant aquis le(s) caractère(s) de résistance aux antibiotiques
transférables sont sélectionnées et testées par l’antibiogramme pour déterminer leur profil
d’antibiorésistance (Courvalin et al., 1985).
Technique
La conjugaison a été effectuée en milieu solide (Courvalin et al., 1985),
Cultiver les souches donatrice et réceptrice dans un bouillon B.H.I.B pendant 18heures
à 37°C,
Centrifuger 1,5ml de chaque souche à 12000 tr/mn pendant 2mn,
Récupérer le culot, puis le resuspendre dans 100µl d’eau physiologique,
Agiter au vortex afin de bien homogénéiser,
Mélanger 100µl de la réceptrice avec 50µl de la donatrice,
Spoter 50µl du mélange dans une boite de gélose M.H,
Laisser sécher puis incuber à 37°C pendant 18h,
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II.2.4.4. Détection des β
β β
β-lactamases à spetre élargi (BLSE) : test de synergie
La détection d’une BLSE a été réalisée en parallèle avec l’antibiogramme par la
méthode de diffusion en milieu solide. Ce test est basé sur la mise à profit d’une image de
synergie entre au moins une céphalosporine 3
ième génération (C3G) et/ou l’aztréonam et un
inhibiteur de β-lactamases tel que l’acide clavulanique. Cette synergie se traduit par une
augmentation nette de l’activité des C3G et/ou l’aztréonam du côté de l’inhibiteur (acide
clavulanique) (Jarlier et al., 1988 ; Vedel, 2005).
II.2.4.5. Transfert génétique par conjugaison bactérienne
Principe
Le transfert génétique permet la mise en évidence de plasmides conjugatifs portants
des caractères de résistance aux antibiotiques. Il se fait par un croisement de la souche
sauvage (donatrice) avec une souche réceptrice (ex : E. coli J53 RA
R , ou E.coli k12 NA
R )
dépourvue de plasmide et possédant dans ce cas, un caractère de résistance obtenu par
mutation chromosomique (Rifampicine ou alors l’acide nalidixique), auquel la donatrice est
sensible.
Les bactéries réceptrices ayant aquis le(s) caractère(s) de résistance aux antibiotiques
transférables sont sélectionnées et testées par l’antibiogramme pour déterminer leur profil
d’antibiorésistance (Courvalin et al., 1985).
Technique
La conjugaison a été effectuée en milieu solide (Courvalin et al., 1985),
Cultiver les souches donatrice et réceptrice dans un bouillon B.H.I.B pendant 18heures
à 37°C,
Centrifuger 1,5ml de chaque souche à 12000 tr/mn pendant 2mn,
Récupérer le culot, puis le resuspendre dans 100µl d’eau physiologique,
Agiter au vortex afin de bien homogénéiser,
Mélanger 100µl de la réceptrice avec 50µl de la donatrice,
Spoter 50µl du mélange dans une boite de gélose M.H,
Laisser sécher puis incuber à 37°C pendant 18h,