Réseaux de surveillance
41
Photo 18. L’oued de Taza.
Photo 19. L’oued de Dar-El-Oeud.
2.3.3. Surveillance des métaux lourds
3.3.1.1. Dans la matière vivante (biomarqueurs)
Cette opération de surveillance consiste a échantillonner des organismes marins moules,
huîtres (ex : Mytilus galloprovincialis), à évaluer la stabilité lysosomale membranaire
(syndrome du stresse) et mesurer l’augmentation du niveau de métallothionéines qui indique
la présence probable des métaux lourds.
-L’échantillonnage
Une série de points de prélèvements sont échantillonnés quatre fois par ans, ces fréquences
adoptées permettent d’intégrer les variations saisonnières des métaux lourds.
-L’évaluations au laboratoire
-La stabilité lysosomale membranaire
L’évaluation de la stabilité lysosomale membranaire passe par un « test de rouge neutre » ou
«Neutral Red Rétention Time» en incubant les cellule vivantes avec un colorant rouge et en
observant le temps de décoloration des lysosomes, en particulier le temps au bout duquel 50%
des lysosomes dans les cellules ont libéré le colorant dans le cytosol (temps de
déstabilisation). Une augmentation des taux de libération, et donc une diminution du temps de
déstabilisation, indiquera un stress pour les organismes.
Le protocole utilisé
- Prélèvement de l’hémolymphe sur les animaux vivants : Insérer les ciseaux à mi chemin le
long de la surface ventrale de la moule et écarter partiellement les valves, pour pouvoir insérer
la seringue hypodermique (photo 19). Enlever l’eau de la coquille et remplir une eppendorf
avec 0,5 ml de solution saline physiologique et aspirer 0,5 ml d’hémolymphe du muscle
abducteur postérieur de la moule. Après avoir obtenu l’échantillon d’hémolymphe (0,5 ml),
éliminer l’aiguille et vider le contenu de la seringue dans les tubes à eppendorf contenant au
préalable la solution saline .On fait l’analyse pour chaque moule d’échantillons.
- Préparation d’une lame pour chaque moules et coloration:
- Mettre 2 μl de Poly-L-Lysine, diluée au 1/10 dans de l’eau distillée, sur une lame de
microscopie et étalement avec une lamelle et laisser séché.
- Après distribuer 40 μl d’hémolymphe sur la lame, là où la Poly-L-Lysine a été étalée,
incubation dans une chambre humide à l’abri de la lumière pendant 30 minutes pour permettre
41
Photo 18. L’oued de Taza.
Photo 19. L’oued de Dar-El-Oeud.
2.3.3. Surveillance des métaux lourds
3.3.1.1. Dans la matière vivante (biomarqueurs)
Cette opération de surveillance consiste a échantillonner des organismes marins moules,
huîtres (ex : Mytilus galloprovincialis), à évaluer la stabilité lysosomale membranaire
(syndrome du stresse) et mesurer l’augmentation du niveau de métallothionéines qui indique
la présence probable des métaux lourds.
-L’échantillonnage
Une série de points de prélèvements sont échantillonnés quatre fois par ans, ces fréquences
adoptées permettent d’intégrer les variations saisonnières des métaux lourds.
-L’évaluations au laboratoire
-La stabilité lysosomale membranaire
L’évaluation de la stabilité lysosomale membranaire passe par un « test de rouge neutre » ou
«Neutral Red Rétention Time» en incubant les cellule vivantes avec un colorant rouge et en
observant le temps de décoloration des lysosomes, en particulier le temps au bout duquel 50%
des lysosomes dans les cellules ont libéré le colorant dans le cytosol (temps de
déstabilisation). Une augmentation des taux de libération, et donc une diminution du temps de
déstabilisation, indiquera un stress pour les organismes.
Le protocole utilisé
- Prélèvement de l’hémolymphe sur les animaux vivants : Insérer les ciseaux à mi chemin le
long de la surface ventrale de la moule et écarter partiellement les valves, pour pouvoir insérer
la seringue hypodermique (photo 19). Enlever l’eau de la coquille et remplir une eppendorf
avec 0,5 ml de solution saline physiologique et aspirer 0,5 ml d’hémolymphe du muscle
abducteur postérieur de la moule. Après avoir obtenu l’échantillon d’hémolymphe (0,5 ml),
éliminer l’aiguille et vider le contenu de la seringue dans les tubes à eppendorf contenant au
préalable la solution saline .On fait l’analyse pour chaque moule d’échantillons.
- Préparation d’une lame pour chaque moules et coloration:
- Mettre 2 μl de Poly-L-Lysine, diluée au 1/10 dans de l’eau distillée, sur une lame de
microscopie et étalement avec une lamelle et laisser séché.
- Après distribuer 40 μl d’hémolymphe sur la lame, là où la Poly-L-Lysine a été étalée,
incubation dans une chambre humide à l’abri de la lumière pendant 30 minutes pour permettre