Chapitre 5:
Méthodes d’indentification des caroténoïdes
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2.1. Principe de la méthode :
Cette méthode chromatographique permet de séparer les constituants d’un mélange en
utilisant les différences entre les constantes d'équilibre de ces composés lors de leurs partage
/adsorption entre une phase mobile (liquide) dans laquelle ils sont solubles ; et une phase dite
fixe ou stationnaire (liquide/solide) qui exerce sur eux un effet retardateur. Les interactions
mises en jeu peuvent être de différentes natures : dipole-dipole, hydrophobes, liaison
hydrogène……….
La phase mobile poussée par une pompe sous haute pression, parcourt en permanence
le système chromatographique. Le mélange de solutés dissous dans un solvant, est injecté par
l’intermédiaire d’une vanne, puis transporté au travers du système chromatographique. Au
niveau de la colonne les composés en solution se répartissent selon leur affinité, entre la phase
mobile et la phase stationnaire. Le signal enregistré à la sortie d’un détecteur approprié (U.V.
ou autre) après passage du soluté à analyser à travers la colonne, a la forme d’un pic
constituant un chromatogramme.
2.2. Composition d’un appareil de HPLC
Au cours des dernières années, cet appareillage a connu un développement important
par le degré de perfectionnement et d’automatisation lié à l’utilisation des microprocesseurs,
en particulier dans le domaine de la détection.