Chapitre II
Matériel et méthodes
21
II.3.1.4. Dosage de la chlorophylle a par spectrophotométrie
 Principe de la méthode
La méthode consiste à filtrer un volume d’eau à travers un filtre. Le filtre sera ensuite immergé
dans un solvant qui assurera l’extraction des pigments chlorophylliens, puis, on mesure
l’absorbance avant et après acidification de l’extrait (Aminot et Chaussepied, 1983).
 Mode opératoire
 Filtration de l’échantillon (250 ml) ;
 Congélation des filtres de type GF/F ;
 Extraction de la chlorophylle a ;
 Mesure de l’absorbance des pigments;
 Calcul de la concentration par la formule de Lorenzen (1967) in (Aminot et Chaussepied,
1983) :
 V : volume d’eau filtré (l).
 v : volume de solvant d’extraction (ml).
 l : longueur du trajet optique de la cuve de mesure (cm).
 A
na
665 : absorbance corrigée (n.a: non acidifiée).
 A
a
665 : absorbance corrigée (a: acidifiée).
 26.7 et 1.5 : constantes
II.3.2. Analyse des paramètres chimiques
II.3.2.1. Dosage des sels nutritifs
II.3.2.1. 1.Méthode d’analyse
La méthode utilisée pour le dosage des sels nutritifs (NO3
-
, NO2
-
, PO4
3- , SiO2 et NH4
+ ) est le
dosage par colorimétrie à flux continu et automatisé, sur l’appareil « Auto Analyser San Plus »
S.F.A.S troisième génération (Annexe I ) selon les protocoles définis par SKALAR, 1998.
Le mode opératoire détaillé pour le dosage de chaque sel ainsi que les réactifs utilisés sont
consignés en annexe I.
 Principe général
Le principe de dosage des sels nutritifs est basé sur une réaction de coloration. En effet ces
sels réagissent dans certaines conditions (T°, C, pH, Catalyseur …) avec des réactifs spécifiques
pour donner naissance à une coloration absorbant la lumière à une certaine longueur d’ondes (λ ).
L’absorption de l’énergie lumineuse dépend de l’intensité de la coloration, de même cette dernière
est d’autant plus importante que la solution est concentrée en sel dosé. La colorimétrie est basée sur
la loi de Beer-Lambert qui est définit comme suit :
Avec:
- I0, I : est l’intensité lumineuse incidente et émergente du milieu absorbant ;
- A : est l’absorbance ou densité optique ;
- ε : est le coefficient d’extinction moléculaire ;
(26, 7*(A
na
665 A
a
665 )*v)
[Chlorophylle a] (mg/m
3
) =
V*l
(26, 7*(1.5* A
a
665 A
na
665 )*v)
[ Phéopigments] (mg/m
3
) =
V*l
A = Ln I 0 / I = ε .L.C