Chapitre 2
Matériels & Méthodes
33
2.5.2.2. Analyse microbiologique
Au laboratoire, l’objectif était de mettre en évidence la présence de pollution bactérienne
d’origine humaine qui a concerné la recherche et le dénombrement des germes révélateur
de contamination fécale, qui selon Figarella et al., 2001 entraînent par leur abondance,
la présomption d’une contamination plus dangereuse. Ce sont les conformes totaux,
les conformes fécaux, les streptocoques fécaux et Escherichia coli. Le dénombrement
est effectué par la méthode du nombre le plus probable (NPP) obtenu à l’aide de la table
de Mc-Grady (voir annexe 4) (Brisou et Denis, 1980 ; Rodier et al., 1996). Après inoculation
de tubes en milieu liquide (Joly et Raynaud, 2003).
2.5.2.2.1. Prélèvement
Un examen bactériologique ne peut être valablement interprété que s’il est effectué sur
un échantillon correctement prélevé. Le prélèvement des échantillons s’est effectué
en surface, au niveau des stations décrites précédemment. Les échantillons d’eau ont été
recueillis dans des flacons de verre de 500ml stérilisés (140°C), puis bouchés
et soigneusement étiquetés. Si certaines précautions ne sont pas prisées, la teneur initiale
en germes des eaux risque de subir des modifications dans le flacon après prélèvement.
L’évaluation est d’ailleurs assez difficile à prévoir et dépend de nombreux facteurs :
température, concurrence bactérienne des espèces présentes, composition chimique
de l’eau. C’est pour cela que les échantillons ont été transportés dans des glacières dont
la température est comprise entre 4 et 6°C afin de les protéger de la lumière du soleil
et de la chaleur jusqu’au moment de l’analyse, 24 après (Aminot et Chaussepied, 1983).
Les analyses bactériologiques ont été faites au niveau du laboratoire de microbiologie
de l’ENSV
1 avec l’aide des techniciens en microbiologie.
2.5.2.2.2. Recherche et dénombrement des coliformes : colimétrie
Les coliformes sont des bâtonnets, anaérobies facultatifs, gram (-) non sporulants
permettant l’hydrolyse du lactose à 35°C (OMS, 1979) avec dégagement de gaz.
Les coliformes regroupent les genres Echerichia, Citrobacter, Entérobacter, Klébsiella,
Yersinia, Serratia (Rodier et al., 1996 ; Joly et Reynaud, 2003).
La recherche et le dénombrement de l’ensemble des coliformes (coliformes totaux),
sans préjuger de leur appartenance taxonomique et de leur origine, est capital pour
la vérification de l’efficacité d’un traitement désinfectant et est d’un intérêt nuancé pour
déceler une contamination d’origine fécale (Rodier et al., 1996). La recherche
et le dénombrement des coliformes thermotolérants est un examen proposé en raison d’une
concordance statistique entre leur présence et l’existence d’une contamination fécale quasi
certaine (Rodier et al., 1996). Escherichia coli est le type de coliformes d’habitat fécal
exclusif ; sa recherche est donc extrêmement importante.
A- Principe :
Après ensemencement et incubation, l’aspect du milieu de culture est modifié par
les germes (E-coli ou coliformes thermotolérants) dont la présence est ensuite confirmée
et le nombre précisé.
1 École Nationale Supérieure Vétérinaire
Matériels & Méthodes
33
2.5.2.2. Analyse microbiologique
Au laboratoire, l’objectif était de mettre en évidence la présence de pollution bactérienne
d’origine humaine qui a concerné la recherche et le dénombrement des germes révélateur
de contamination fécale, qui selon Figarella et al., 2001 entraînent par leur abondance,
la présomption d’une contamination plus dangereuse. Ce sont les conformes totaux,
les conformes fécaux, les streptocoques fécaux et Escherichia coli. Le dénombrement
est effectué par la méthode du nombre le plus probable (NPP) obtenu à l’aide de la table
de Mc-Grady (voir annexe 4) (Brisou et Denis, 1980 ; Rodier et al., 1996). Après inoculation
de tubes en milieu liquide (Joly et Raynaud, 2003).
2.5.2.2.1. Prélèvement
Un examen bactériologique ne peut être valablement interprété que s’il est effectué sur
un échantillon correctement prélevé. Le prélèvement des échantillons s’est effectué
en surface, au niveau des stations décrites précédemment. Les échantillons d’eau ont été
recueillis dans des flacons de verre de 500ml stérilisés (140°C), puis bouchés
et soigneusement étiquetés. Si certaines précautions ne sont pas prisées, la teneur initiale
en germes des eaux risque de subir des modifications dans le flacon après prélèvement.
L’évaluation est d’ailleurs assez difficile à prévoir et dépend de nombreux facteurs :
température, concurrence bactérienne des espèces présentes, composition chimique
de l’eau. C’est pour cela que les échantillons ont été transportés dans des glacières dont
la température est comprise entre 4 et 6°C afin de les protéger de la lumière du soleil
et de la chaleur jusqu’au moment de l’analyse, 24 après (Aminot et Chaussepied, 1983).
Les analyses bactériologiques ont été faites au niveau du laboratoire de microbiologie
de l’ENSV
1 avec l’aide des techniciens en microbiologie.
2.5.2.2.2. Recherche et dénombrement des coliformes : colimétrie
Les coliformes sont des bâtonnets, anaérobies facultatifs, gram (-) non sporulants
permettant l’hydrolyse du lactose à 35°C (OMS, 1979) avec dégagement de gaz.
Les coliformes regroupent les genres Echerichia, Citrobacter, Entérobacter, Klébsiella,
Yersinia, Serratia (Rodier et al., 1996 ; Joly et Reynaud, 2003).
La recherche et le dénombrement de l’ensemble des coliformes (coliformes totaux),
sans préjuger de leur appartenance taxonomique et de leur origine, est capital pour
la vérification de l’efficacité d’un traitement désinfectant et est d’un intérêt nuancé pour
déceler une contamination d’origine fécale (Rodier et al., 1996). La recherche
et le dénombrement des coliformes thermotolérants est un examen proposé en raison d’une
concordance statistique entre leur présence et l’existence d’une contamination fécale quasi
certaine (Rodier et al., 1996). Escherichia coli est le type de coliformes d’habitat fécal
exclusif ; sa recherche est donc extrêmement importante.
A- Principe :
Après ensemencement et incubation, l’aspect du milieu de culture est modifié par
les germes (E-coli ou coliformes thermotolérants) dont la présence est ensuite confirmée
et le nombre précisé.
1 École Nationale Supérieure Vétérinaire