Matériels et méthodes
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même dispositif SPE (Soumani, 2007), en essayant de varier le solvant d’élution. Le
protocole préconisé est le suivant :
- Cartouche de 200 mg de phase adsorbante Lichrolut EN ;
- Conditionnement avec 10 ml de méthanol à 10 ml.min1
;
- Lavage avec 10 ml d’eau ultra pure à 10 ml.min
-1
;
- Chargement de 500 ml d’échantillon à 20 ml.min
-1
;
- Lavage avec 10 ml d’eau ultra pure à 10 ml.min
-1
;
- Séchage avec un flux moyen d’air pendant 25 minutes ;
- Elution en deux étapes :
• Imprégnation avec 15 ml de méthanol et collecte de la fraction,
• Application de 10 ml de méthanol à 2 ml.min
-1
Le volume de 25 ml de l’éluât récupéré est évaporé sous un faible flux d’air dans un bain
marie à 28 °C jusqu’à un volume final de 0,5ml. Un aliquote de 20 μl de ce dernier est injecté
dans l’HPLC dans les conditions opératoires citées ci - dessous. En l’absence d’eau ultra pure,
nous avons utilisé de l’eau distillée.
I.3. Analyse chromatographique
La séparation des molécules s’effectue sur une colonne analytique à température ambiante
par injection d’un volume de 20 µl de l’extrait final. La phase mobile est constituée d’un
mélange acétonitrile /eau (95/5, V/V) dégazée avant utilisation à un débit de 1 ml.min
-1
. La
détection s’opère dans le domaine de l’UV à la longueur d’onde 210 nm qui correspond au
maximum d’absorption de la molécule étudiée. L’identification de cette dernière se réfère à
son temps de rétention et son spectre UV. La méthode des injections comparées (étalonnage
externe) et la détermination de la surface du pic chromatographique sont utilisées pour la
quantification des résidus de cette molécule.
II.5. Calcul et expression des résultats
A chaque variable, un lot de 5 échantillons est préparé. Pour chaque lot d’échantillons
analysés un blanc est réalisé, il correspond à l’analyse d’un volume d’eau non dopée égal à
celui de l’échantillon avec la même procédure. Le blanc permet de détecter et d’estimer les
pics interférents. La performance de la méthode se réfère au recouvrement ainsi qu’à l’écart -
type obtenu. La quantité dosée est exprimée en μg.l
-1
d’ibuprofène d’après l’équation suivante
:
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même dispositif SPE (Soumani, 2007), en essayant de varier le solvant d’élution. Le
protocole préconisé est le suivant :
- Cartouche de 200 mg de phase adsorbante Lichrolut EN ;
- Conditionnement avec 10 ml de méthanol à 10 ml.min1
;
- Lavage avec 10 ml d’eau ultra pure à 10 ml.min
-1
;
- Chargement de 500 ml d’échantillon à 20 ml.min
-1
;
- Lavage avec 10 ml d’eau ultra pure à 10 ml.min
-1
;
- Séchage avec un flux moyen d’air pendant 25 minutes ;
- Elution en deux étapes :
• Imprégnation avec 15 ml de méthanol et collecte de la fraction,
• Application de 10 ml de méthanol à 2 ml.min
-1
Le volume de 25 ml de l’éluât récupéré est évaporé sous un faible flux d’air dans un bain
marie à 28 °C jusqu’à un volume final de 0,5ml. Un aliquote de 20 μl de ce dernier est injecté
dans l’HPLC dans les conditions opératoires citées ci - dessous. En l’absence d’eau ultra pure,
nous avons utilisé de l’eau distillée.
I.3. Analyse chromatographique
La séparation des molécules s’effectue sur une colonne analytique à température ambiante
par injection d’un volume de 20 µl de l’extrait final. La phase mobile est constituée d’un
mélange acétonitrile /eau (95/5, V/V) dégazée avant utilisation à un débit de 1 ml.min
-1
. La
détection s’opère dans le domaine de l’UV à la longueur d’onde 210 nm qui correspond au
maximum d’absorption de la molécule étudiée. L’identification de cette dernière se réfère à
son temps de rétention et son spectre UV. La méthode des injections comparées (étalonnage
externe) et la détermination de la surface du pic chromatographique sont utilisées pour la
quantification des résidus de cette molécule.
II.5. Calcul et expression des résultats
A chaque variable, un lot de 5 échantillons est préparé. Pour chaque lot d’échantillons
analysés un blanc est réalisé, il correspond à l’analyse d’un volume d’eau non dopée égal à
celui de l’échantillon avec la même procédure. Le blanc permet de détecter et d’estimer les
pics interférents. La performance de la méthode se réfère au recouvrement ainsi qu’à l’écart -
type obtenu. La quantité dosée est exprimée en μg.l
-1
d’ibuprofène d’après l’équation suivante
: