Chapitre II : Matériel et Méthodes
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Figure 2.6. Spectrophotomètre de Fluorescence
c) Etalonnage de l'appareil
A l'heure actuelle, on ne dispose pas de substance de référence totalement satisfaisante
pour le dosage spectroscopie par fluorescence. C'est pourquoi il est recommandé aux
laboratoires d’utiliser le chrysène comme principale substance de référence (C.O.I, 1982 ;
Marchand, 1983).
d) Préparation des standards
La standardisation de l'appareil nécessite un hydrocarbure de comparaison ou étalon
de référence. Celui préconisé est le chrysène ou 1,2 benzophenanthrène (C 18 H 12 ). La gamme
étalon se compose de 2 mg de chrysène dissous dans 10 ml d'hexane soit de 10 mg/50 ml ou
bien 200 μg/ml (Tableau 2.2). Cette préparation est la solution mère ou solution initiale. Un
volume de 1 ml est prélevé de cette dernière et dilué dans 25 ml afin d'obtenir une solution
intermédiaire de 8 μg/ml.
A partir de cette seconde solution, des dilutions sont réalisées pour aboutir aux cinq
solutions filles ou gamme étalon. Les fioles contenant les solutions standards sont placées
dans un bac à ultrasons pendant deux minutes dans le but de faire dissoudre le Chrysène dans
de l'hexane (Figure 2.7).
Tableau.2.2. Concentration des standards (
)
Standard
S1
S2
S3
S4
S5
[C] μg/ml
0.2
0.4
0.6
0.8
1