Matériels et méthodes
18
a)-Recherche et dénombrement des germes :
Les germes recherchés sont les coliformes totaux, les coliformes fécaux, les vibrions et les
streptocoques fécaux. Ces germes sont peu ou pas pathogène, ils sont révélateur de contamination
fécale et entrainent par leur abondance la présomption de contamination plus dangereuse (Figrella et
al, 2001) in (Laama, 2009).Les germes supplémentaires recherchés sont les staphylocoques, les
sulfitoréducteurs et la salmonelle
a-1- Méthode de dénombrement :
Dans la présente étude, nous avons utilisé deux méthodes de dénombrement :
• La méthode de fermentation en tube multiples appelée aussi méthode de nombre le plus
probable(NPP) pour les coliformes totaux, fécaux et les streptocoques.
• La méthode de filtration sur membrane pour les staphylocoques.
-Méthode du nombre plus probable(NPP) :
La méthode de détermination du nombre le plus probable(NPP) est une estimation statistique du
nombre de germes dans un milieu liquide (Joy et Raynaud, 2003) in (Laama, 2009).
La détermination du nombre caractéristique (le nombre des tubes positifs) permettra l’établissement
du nombre le plus probable à l’aide de la table de Mc Grady (Bisous et Denis., 1980) in (Laama,
2009).
-Méthode de filtration :
La technique de filtration est une estimation plus exacte sur la charge bactérienne, elle consiste à faire
passer des produits liquides sur une paroi poreuse ou sur une membrane qui retient les bactéries avec
un quadrillage en surface facilitant les dénombrements.
(Dellarras, 2007) in (Laama, 2009).
a-2- Dénombrement des coliformes :
Le Dénombrement des coliformes a été effectué par la méthode de NPP. Il fait appel à deux tests
consécutifs à savoir :
Test présomptif :
Réservé la recherche des coliformes totaux. Fait sur un milieu sélectif (bouillon lactose), sa
fermentation se traduit par u dégagement de gaz dans la cloche de Durham et un trouble après une
incubation à 37°C.
Test confirmatif :
Réservé pour la recherche des coliformes fécaux et Escherichia coli sur un milieu plus sélectif (VBL)
à une température de 44°C, à partir des tubes positifs du test présomptif.
18
a)-Recherche et dénombrement des germes :
Les germes recherchés sont les coliformes totaux, les coliformes fécaux, les vibrions et les
streptocoques fécaux. Ces germes sont peu ou pas pathogène, ils sont révélateur de contamination
fécale et entrainent par leur abondance la présomption de contamination plus dangereuse (Figrella et
al, 2001) in (Laama, 2009).Les germes supplémentaires recherchés sont les staphylocoques, les
sulfitoréducteurs et la salmonelle
a-1- Méthode de dénombrement :
Dans la présente étude, nous avons utilisé deux méthodes de dénombrement :
• La méthode de fermentation en tube multiples appelée aussi méthode de nombre le plus
probable(NPP) pour les coliformes totaux, fécaux et les streptocoques.
• La méthode de filtration sur membrane pour les staphylocoques.
-Méthode du nombre plus probable(NPP) :
La méthode de détermination du nombre le plus probable(NPP) est une estimation statistique du
nombre de germes dans un milieu liquide (Joy et Raynaud, 2003) in (Laama, 2009).
La détermination du nombre caractéristique (le nombre des tubes positifs) permettra l’établissement
du nombre le plus probable à l’aide de la table de Mc Grady (Bisous et Denis., 1980) in (Laama,
2009).
-Méthode de filtration :
La technique de filtration est une estimation plus exacte sur la charge bactérienne, elle consiste à faire
passer des produits liquides sur une paroi poreuse ou sur une membrane qui retient les bactéries avec
un quadrillage en surface facilitant les dénombrements.
(Dellarras, 2007) in (Laama, 2009).
a-2- Dénombrement des coliformes :
Le Dénombrement des coliformes a été effectué par la méthode de NPP. Il fait appel à deux tests
consécutifs à savoir :
Test présomptif :
Réservé la recherche des coliformes totaux. Fait sur un milieu sélectif (bouillon lactose), sa
fermentation se traduit par u dégagement de gaz dans la cloche de Durham et un trouble après une
incubation à 37°C.
Test confirmatif :
Réservé pour la recherche des coliformes fécaux et Escherichia coli sur un milieu plus sélectif (VBL)
à une température de 44°C, à partir des tubes positifs du test présomptif.