Chapitre II
Matériel et méthodes
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4.3.3. Recherche et dénombrement des bactéries dans les sédiments
3.3.3.1. Dénombrement des coliformes et des streptocoques fécaux en milieu liquide par la
détermination du nombre le plus probable (NPP).
C’est une estimation statistique du nombre de germes dans un milieu liquide (Joy et
Raynaud., 2003).
Dans notre étude, trois tubes d’un milieu convenablement choisi sont ensemencés par 1ml de
la suspension mer et de chaque dilution effectuée. La présence des bactéries se traduit par
l’apparition d’un trouble, dégagement de gaz, dépôt au fond.
La détermination du nombre caractéristique (le nombre de tubes positifs) permettra
l’établissement du nombre le plus probable à l’aide de la table de Mc Grady (Annexe II) qui donne
pour chaque chiffre caractéristique le nombre de cellules le plus probable dans un 1ml du tube
utilisé. (Brisou et Denis ., 1980 in Rodier et al ., 2005).
 Mode opératoire
 Décongeler le sédiment à analyser ;
 Peser 25g devant un bec benzène et lui rajouter 225 ml d’eau distillée stérile dans un flacon
stérile, bien homogénéiser le tout (dilution mère : 10
-1 ) ;
 Prendre 10 ml à l’aide d’une pipette graduée stérile de DM pour la mettre dans un tube
stérile (10
-1 ), de même préparer d’autres dilutions : 10
-2 et 10
-3 . (Voir figure 16 )
a. Dénombrement des coliformes totaux et des coliformes fécaux
A partir de chaque dilution, prélever 01 ml et ensemencer une série de trois tubes contenant
10 ml du bouillon lactosé bilié au vert brillant (BLBVB) et une cloche de Durham. L’incubation se
fait à 37°C pour les tubes destinés au dénombrement des coliformes totaux et à 44°C pour les
coliformes fécaux pendant 24 h à 48 h.(figure II.20).
 Lecture
Les tubes présentant un trouble avec production de gaz au niveau de la cloche sont considérés
comme positifs.
Le résultat est donné en nombre de germes pour 100ml en se référant à la table NPP.