Chapitre II
Matériel et méthodes
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4.3. Analyse microbiologique
Les germes recherchés sont les coliformes totaux, les coliformes fécaux dont Escherichia coli
et les streptocoques fécaux .ces germes sont peu ou pas pathogène, ils sont révélateur de
contamination fécale et entrainent par leur abondance la présomption de contamination plus
dangereuse (Figarella et al ,2001).
Les germes supplémentaires dénombrés sont les indicateurs de proximité ou d’une
contamination fécale ancienne : les staphylocoques, les sulfitoréducteurs ainsi que les mycètes
(levures et moisissures au niveau de la chair des oursins). Les vibrions et les salmonelles ont aussi
été recherchés (présence ou absence).
Au total, trois matrices ont fait l’objet de l’examen bactériologique : Eau de mer, sédiments
et oursins.
4.3.1. Analyse bactériologique de l’eau de mer
Nous avons opté pour la méthode de filtration sur membrane pour estimer la charge
bactérienne contenue dans l’eau de mer. C’est la méthode de concentration la plus utilisée au
laboratoire, pour sa facilité et sa reproductibilité.
Elle consiste à recueillir, sur une membrane stérile un volume donné de produits à analyser
(eau usée’ eau de consommation et l’eau de mer), la membrane est ensuite déposée sur un milieu
nutritif convenable ; après incubation, les colonies sont dénombrées et identifiées (Champiat et
Larpent, 1994).
a. Matériel :
 Dispositif de filtration de marque « Sartorius stedim ». (figure II.12).
 Deux bec-Bunsen de manière à ménager une zone de travail stérile, et à pouvoir stériliser le
matériel ;
 Boites de Pétri avec les milieux de culture spécifiques pour chaque germe ;
 Membranes d’ester de cellulose, filtrantes, de marque MILLIPORE, quadrillées et stériles
(en emballage individuel) de porosité de 0.45µm et de 47 mm de diamètre susceptibles de
retenir les bactéries ;
 Deux Incubateurs (l’un réglé à 37°C et l’autre à 44 °C) ,Pompe à vide ,Pinces stérilisées et
Pipettes.