d. Protocole analytique
 Appliquer 2 ml de solution de carbonate de magnésium sur une membrane(Whatman GF/F) de
0,45 μm, et filtrer 250ml de l’échantillon avec une pression inférieure à 100 mmHg ;
 le filtre est plié sur quatre et enrobé dans du papier aluminium déjà étiqueté. Ensuite les filtres
sont conservés dans un congélateur ;
 Ajouter 6 ml de méthanol à 99.7 % dans les tubes qui contiennent les échantillons à doser ;
 Les tubes sont ensuite bouchés et placés à l’obscurité dans un réfrigérateur (5 °C), pour une
période d'extraction de 30 minutes ;
 Homogénéiser les échantillons on les plaçant dans un centrifugeuse pendant 5 min et 3000
tours/min ;
 Calibrer le spectrophotomètre fluorescence à l’aide d’une série de cinq standards, et un blanc
du méthanol ;
 Remplir la cuvette en quartz avec l’échantillon et prendre la lecture fluorimétrique IF 0 ;
 Acidifier l’échantillon avec 10 µl de HCl de 0.5N et prendre de nouveau une lecture
fluorimétrique IFa ;
 Rincer la cuvette avec le méthanol, avant de faire une nouvelle mesure ;
 Éviter d’exposer les échantillons à la lumière et procéder le plus rapidement possible afin de
minimiser la dégradation de la chlorophylle a par la lumière et la chaleur.
e. Calcul des concentrations
Les concentrations de chlorophylle dans les extraits du méthanol sont déterminées à partir de la
droite d’étalonnage. Elles sont évalués d’après la formule de Lorenzen (1967) in (Aminot et
Chaussepied, 1983) :
IF0 : Intensité de fluorescence avant acidification (U.A) ;
IFa : Intensité de fluorescence après acidification (U.A) ;
K0 : Coefficient d'étalonnage établie avec de la chlorophylle a pure avant acidification ;
[Chlorophylle a](µg/l) = IF0/K0 ×VE/VF
[Phéopigments a] (µg/l) = IF0-IFa/ K0-Ka ×VE/VF