3.Dosage de la chlorophylle a par fluorométrie
La concentration en chlorophylle a été déterminée selon la méthode fluorimétrique de Yenstch et
Menzel (1963) adaptée par Holm-Hansen et Rieman (1978) pour l'extraction des pigments à l'aide du
méthanol. Elle a été élaborée pour une application en milieu marin, a l’avantage d’être très sensible et
ne nécessite qu’un faible volume d’échantillon.
a. Principe de la méthode de dosage
Le phytoplancton est recueilli sur un filtre en fibre de verre (GF/F, de porosité environ 0,45μm et
de diamètre 25mm) et repris dans une solution de méthanol. Les pigments chlorophylliens sont excités
par un faisceau lumineux à 450 nm. La fluorescence émise est mesurée à 670 nm.
b. Appareillage et matériel
Le matériel utilisé doit être exempt de toute trace de contaminant organique, inorganique ou
biologique. Une procédure de lavage adéquate est de rigueur.
Equipement de filtration de marque « Sartorius stedim » avec filtres en fibre de verre (GF/F, de
porosité environ 0,45μm et de diamètre 25mm).
Tubes de mesure en verre.
Centrifugeuse Hettich ZENTRIFUGEN de type EBA 30, avec 12 postes de porte-Filtre.
Spectrophotomètre fluorescence de marque HITACHI, modèle 650 S, équipé d’une
lampe « Xénon » qui est la source du rayonnement UV.
Cuve en quartz de 1 cm de trajet optique, pinces, éprouvettes.
c. Réactifs et étalons
Solution de méthanol pur à 99.7% pour l’extraction.
Solution de carbonate de magnésium (MgCO3) à 1% (Ajouter 1 g de MgCO3 en poudre fine
dans 100 ml d’eau déminéralisée).
Solution mère de chlorophylle a à une concentration de 0.1 μg/l (conserver au congélateur)
Solutions étalons de chlorophylle a dans méthanol 99.7 %, à des concentrations de 2, 5,10,
15, 20 μg/l.
Acide chlorhydrique (HCL) 0,5 N.
La concentration en chlorophylle a été déterminée selon la méthode fluorimétrique de Yenstch et
Menzel (1963) adaptée par Holm-Hansen et Rieman (1978) pour l'extraction des pigments à l'aide du
méthanol. Elle a été élaborée pour une application en milieu marin, a l’avantage d’être très sensible et
ne nécessite qu’un faible volume d’échantillon.
a. Principe de la méthode de dosage
Le phytoplancton est recueilli sur un filtre en fibre de verre (GF/F, de porosité environ 0,45μm et
de diamètre 25mm) et repris dans une solution de méthanol. Les pigments chlorophylliens sont excités
par un faisceau lumineux à 450 nm. La fluorescence émise est mesurée à 670 nm.
b. Appareillage et matériel
Le matériel utilisé doit être exempt de toute trace de contaminant organique, inorganique ou
biologique. Une procédure de lavage adéquate est de rigueur.
Equipement de filtration de marque « Sartorius stedim » avec filtres en fibre de verre (GF/F, de
porosité environ 0,45μm et de diamètre 25mm).
Tubes de mesure en verre.
Centrifugeuse Hettich ZENTRIFUGEN de type EBA 30, avec 12 postes de porte-Filtre.
Spectrophotomètre fluorescence de marque HITACHI, modèle 650 S, équipé d’une
lampe « Xénon » qui est la source du rayonnement UV.
Cuve en quartz de 1 cm de trajet optique, pinces, éprouvettes.
c. Réactifs et étalons
Solution de méthanol pur à 99.7% pour l’extraction.
Solution de carbonate de magnésium (MgCO3) à 1% (Ajouter 1 g de MgCO3 en poudre fine
dans 100 ml d’eau déminéralisée).
Solution mère de chlorophylle a à une concentration de 0.1 μg/l (conserver au congélateur)
Solutions étalons de chlorophylle a dans méthanol 99.7 %, à des concentrations de 2, 5,10,
15, 20 μg/l.
Acide chlorhydrique (HCL) 0,5 N.