Chapitre III
Matériels et méthodes
25
I 0 et I : sont respectivement les intensités lumineuses incidentes et émergentes du milieu
absorbant.
ε : le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur
d’onde.
L : la Longueur du milieu traversé exprimé en cm.
C : Concentration de la solution absorbante exprimée en mol/l.
A : Absorbance de la solution.
D.O : Densité Optique de la solution.
III.2.2.3. Analyse automatique des sels nutritifs
Dosage des nitrites
Les nitrites (NO 2
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide pH<2. Ce
composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé azoïque de couleur
rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider et Robinson, 1952).
Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO 3
-
) en nitrite (NO 2
-
) par le passage de
l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (Wood et al, 1967). Les
nitrites (en réalité NO 2
-
+ NO 3
-
réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon la méthode
précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites déterminés directement
(sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver les concentrations des nitrates
(Rodier et al. 1996).
Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bain marie), les ions
orthophosphates (PO 4
-3 ) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour former un complexe
antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique (Murphy et Riley, 1962). Cette
forme réduite de coloration bleue à un maximum d’absorption à 880nm.
Dosage de silicium dissous
Dans l’eau de mer, le silicium dissous se trouve à 95 % sous forme d’acide orthosilicique (Si(OH) 4 )
(Aminot et Chaussepied, 1983). Cette forme réagit avec le molybdate d’ammonium en milieu acide
pour former un complexe silicomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique en un composé
coloré en bleu absorbant à 810 nm (Mullin et Riley, 1955). On y ajoute l’acide oxalique pour éviter
les interférences des phosphates.
III.2.2.4. Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour chaque
élément à analyser. Les droites d’étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en utilisant
les concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic correspondant. (Annexe II)
Matériels et méthodes
25
I 0 et I : sont respectivement les intensités lumineuses incidentes et émergentes du milieu
absorbant.
ε : le coefficient d’extinction molaire variant en fonction de la température et la longueur
d’onde.
L : la Longueur du milieu traversé exprimé en cm.
C : Concentration de la solution absorbante exprimée en mol/l.
A : Absorbance de la solution.
D.O : Densité Optique de la solution.
III.2.2.3. Analyse automatique des sels nutritifs
Dosage des nitrites
Les nitrites (NO 2
-
) forment un diazoïque par action avec la sulfanilamide en milieu acide pH<2. Ce
composé formera ensuite en présence de N-naphtylethylénediamine un composé azoïque de couleur
rose absorbant la lumière à 540 nm (Benschneider et Robinson, 1952).
Dosage des nitrates
La méthode est basée sur la réduction des nitrates (NO 3
-
) en nitrite (NO 2
-
) par le passage de
l’échantillon à travers une colonne réductrice de cadmium traité au cuivre (Wood et al, 1967). Les
nitrites (en réalité NO 2
-
+ NO 3
-
réduits) seront ensuite dosés par colorimétrie selon la méthode
précédemment décrite. Il suffira alors d’en déduire la concentration des nitrites déterminés directement
(sans passage de l’échantillon sur la colonne réductrice) pour trouver les concentrations des nitrates
(Rodier et al. 1996).
Dosage des orthophosphates
En présence d’antimoine oxytartrate de potassium à une température de 40° C (bain marie), les ions
orthophosphates (PO 4
-3 ) réagissent avec le molybdate d’ammonium pour former un complexe
antimoine phosphomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique (Murphy et Riley, 1962). Cette
forme réduite de coloration bleue à un maximum d’absorption à 880nm.
Dosage de silicium dissous
Dans l’eau de mer, le silicium dissous se trouve à 95 % sous forme d’acide orthosilicique (Si(OH) 4 )
(Aminot et Chaussepied, 1983). Cette forme réagit avec le molybdate d’ammonium en milieu acide
pour former un complexe silicomolybdique qui sera réduit par l’acide ascorbique en un composé
coloré en bleu absorbant à 810 nm (Mullin et Riley, 1955). On y ajoute l’acide oxalique pour éviter
les interférences des phosphates.
III.2.2.4. Etalonnage
Cette opération nécessite la préparation d’une solution mère puis une solution fille pour chaque
élément à analyser. Les droites d’étalonnage sont établies automatiquement par le logiciel en utilisant
les concentrations connues des solutions étalons et leurs hauteurs de pic correspondant. (Annexe II)